过碘酸—Schiff氏法(简称P.A.S)
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  • 过碘酸—Schiff氏法(简称P.A.S)

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2008-03-07    本站论坛

操作方法:

(1)           石蜡切片脱蜡至水。

(2)           0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液(过碘酸再结晶应重新配制使用)。

(3)           蒸馏水洗,70%酒精洗。

(4)           Schiff氏液15-30分钟。(Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用)

(5)           流水冲洗10分钟。

(6)           苏木素浸染细胞核2-3分钟。

(7)           脱水、透明、封盖。

结果:糖原呈红色,细胞核呈蓝色。

试剂配制:

(1)0.     5%过碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。

2Schiff氏试剂。

碱性品红                                           1g

蒸馏水                                             200ml

1N盐酸(98.3ml比重1.16盐酸,加入蒸馏水成1000ml 20ml

偏重亚硫酸钠或钾                                    1g

碱性品红1g加入200ml蒸馏水,搅拌加热沸腾,待冷却至50过滤,加入当量盐酸至25时加入偏重亚硫酸钠。置于暗处,两天后溶液变桔黄色或草黄色,然后加入少量活性碳并震荡、过滤,此时溶液应为无色。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色,染色效果较差。

注意事项:

1、   糖原的固定要及时,而且标本要新鲜。

2、如用无水酒精作糖原的固定剂,有它的弊病,因无水酒精渗透较慢,而且容易产生极化,(极化是糖原颗粒趋向于细胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果较佳,其配法如下:

苦味酸饱和于95%酒精           85ml

40%甲醛                        10ml

冰醋酸                          5ml

3、各种试剂必须化学纯,亚硫酸钠须有浓厚气味,器皿必须洁净而干燥,染色缸亦是。

4、如果Schiff氏试剂,在经过活性碳吸附漂白后不显无色,首先应考虑试剂中的偏重亚硫酸钠是否失效。如果偏重亚硫酸钠气味不浓,使用时可考虑适当的增加用量。其次考虑碱性品红本身,常常虽属同一生产厂家,但不同批号,其效果就可能不同,应特别引起注意。

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