操作方法:
(1) 石蜡切片脱蜡至水。
(2) 0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液(过碘酸再结晶应重新配制使用)。
(3) 蒸馏水洗,70%酒精洗。
(4) Schiff氏液15-30分钟。(Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用)
(5) 流水冲洗10分钟。
(6) 苏木素浸染细胞核2-3分钟。
(7) 脱水、透明、封盖。
结果:糖原呈红色,细胞核呈蓝色。
试剂配制:
(1)0. 5%过碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。
(2)Schiff氏试剂。
碱性品红 1g
蒸馏水 200ml
1N盐酸(98.3ml比重1.16盐酸,加入蒸馏水成1000ml) 20ml
偏重亚硫酸钠或钾 1g
碱性品红1g加入200ml蒸馏水,搅拌加热沸腾,待冷却至50℃过滤,加入当量盐酸至25℃时加入偏重亚硫酸钠。置于暗处,两天后溶液变桔黄色或草黄色,然后加入少量活性碳并震荡、过滤,此时溶液应为无色。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色,染色效果较差。
注意事项:
1、 糖原的固定要及时,而且标本要新鲜。
2、如用无水酒精作糖原的固定剂,有它的弊病,因无水酒精渗透较慢,而且容易产生极化,(极化是糖原颗粒趋向于细胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果较佳,其配法如下:
苦味酸饱和于95%酒精 85ml
40%甲醛 10ml
冰醋酸 5ml
3、各种试剂必须化学纯,亚硫酸钠须有浓厚气味,器皿必须洁净而干燥,染色缸亦是。
4、如果Schiff氏试剂,在经过活性碳吸附漂白后不显无色,首先应考虑试剂中的偏重亚硫酸钠是否失效。如果偏重亚硫酸钠气味不浓,使用时可考虑适当的增加用量。其次考虑碱性品红本身,常常虽属同一生产厂家,但不同批号,其效果就可能不同,应特别引起注意。 上一篇:糖原及粘液染色法 下一篇:粘液染色法