小麦未成熟胚愈伤组织的诱导

一、 实验目的

掌握无菌操作方法，将小麦未成熟胚培养成为愈伤组织。

二、 实验原理

植物体的任何一个细胞都具有全能性。分化了的植物根、茎、叶等组织在一定的条件下进行离体培养，给于一定的营养和激素，可以脱分化为愈伤组织。愈伤组织在不同的营养和激素的作用下，又可以生出完整的小植株。植物的脱分化和分化培养，证明分化了的植物细胞仍具备形成完整植株所需要的全套基因。

三、 培养基的制备

1．母液的配制：
大量元素（10倍的母液）

铁盐
有机成分
甘氨酸
激素

2．培养基的配制：
取各种成分后，加入3%蔗糖和0.6%琼脂，加热溶化，用1NHCL或1N NaOH调PH至5.8。
3．分装：25-30瓶/升
1．灭菌：15磅，20分钟
一、 实验步骤
1．取材：小麦受粉后10-15天，小麦长大至半仁，颖壳稍胀开，此时未成熟胚颜色发白。
2．整穗：剪去芒，70%酒精消毒。
3．剥粒：剥取带颖壳的麦粒15-20粒。
4．消毒：用纱布包裹麦粒置0.1%升汞中消毒10分钟。
5．接种：
(1)用蘸有70%酒精的棉球消毒手及超净台。
(2)把一切用具（包括镊子、解剖针、解剖刀等）放于70%酒精中消毒，并在酒精灯上烧，待冷却后使用。
(3)取一瓶培养基，除去皮筋，将锡箔纸取也放在超净台上。
(4) 将消毒后的麦粒用无菌水冲洗3次，置于无菌的滤纸上。
(5)剥取未成熟胚，将其接种在培养基上，每瓶接种10个左右即可。
6．培养：25℃，培养15天。
7．观察：
第一周观察：所取的胚过于成熟，则胚芽鞘已形成，所诱导的愈伤组织易出芽；若胚太嫩，则生长缓慢，愈伤组织成堆生长。
第二周观察：外周透明部分为衰老细胞，不具分生能力，容易褐化死亡。其特点是细胞呈不规则形，胞质空，核占很小的比例。中央有一定硬度、组织较致密的小白点，为生长点，由分生细胞组成，分生能力很强。其特点是圆形、内含物丰富，核占的比例较大，可见到正在分裂的细胞。
制片步骤：
固定（卡诺固定液固定5-10分钟）→酸解（1N HCL）→水洗→染色（改良苯酚品红染色3-5分钟）→压片→镜检
评分标准：
操作基础分为4分；第一周未污染为5分；第二周未污染为6分；找到衰老细胞和分生细胞各加1分；找到前、中、后、末四个时期加2分。