粗糙链孢霉的杂交实验

3.显微镜观察：

（1）在长有子囊果的试管中加少量无菌水，摇动片刻，把水倒在空三角瓶中，加热煮沸，以防止分生孢子飞扬。

（2）取一载玻片，滴1—2滴5％次氯酸钠，然后用接种针挑出子囊果放在载玻片上（若附在子囊果上的分生孢子过多，可先在5％次氯酸钠中洗涤，再移到载玻片上），用另一载玻片盖上，用手指压片，将子囊果压破，置显微镜下（10×15倍）检查，即可见到30—40个子囊。观察子囊中子囊孢子的排列情况。这里用载玻片盖上压片而不用盖玻片，是因为子囊果很硬，用盖玻片压，盖玻片会破碎。也可在显微镜下用镊子把子囊果轻轻夹破，挤出子囊。如发现30—40个子囊象一串香蔗一样，可加一滴水，用解剖针把子囊拨开。此过程无需无菌操作，但要注意不能使分生孢子散出。观察过的载玻片、用过的镊子和解剖针等物都需放入5％的石碳酸中浸泡后取出洗净，以防止污染实验室。

操作步骤见图10-5。

4.实验步骤说明

（1）实验所用的赖氨酸缺陷型，有时接种在完全培养基上，也长不好，需要加适量赖氨酸。

（2）杂交后培养温度要控制在25℃；30℃以上即抑制原子囊果的形成。

六、实验结果

1.观察一定数目的子囊果，记录每个完整子囊的类型，计算Lys基因的着丝粒距离。

2.绘一显微镜下观察到的杂交子囊的图。

3.说明粗糙链孢霉中基因分离现象和高等动物、高等植物中基因分离的主要区别。

4.用图表示第六种子囊类型的形成。

5.实验结果说明：

（1）赖氨酸缺陷型的子囊孢子成熟较迟，当野生型的子囊孢子已成熟而呈黑色时，赖氨酸缺陷型的子囊孢子还呈灰色，因而我们能在显微镜下直接观察不同的子囊类型。但是如果观察时间选择不当，就不能看到好的结果。过早，所有子囊孢子都未成熟，全为灰色；过迟，赖氨酸缺陷型的子囊孢子也成熟了，全为黑色，就不能分清各种子囊类型。所以在子囊果形成期间，要预先观察子囊孢子的成熟情况，选择适当时间进行显微镜观察。

（2）有时观察到的子囊孢子的排列为＋＋＋＋＋＋——，＋＋——————，＋＋＋＋＋———，———＋＋＋＋＋，即为6∶2或2∶6的分离比和5∶3或3∶5的分离比。排除上面第（1）点说明的原因外，这样的情况的出现是由于基因转变造成的。基因转变的频率因基因位点不同而异，但一般在1％左右。

（3）本实验用的赖氨酸缺陷型菌株为Lys5，Lys5基因座位于第六连锁群，着丝粒距离约为14.8图距单位。可供实验结果计算时参考。