粗糙链孢霉的杂交实验

重组值除去％，即作为图距。

某基因的着丝粒距离

二、实验目的

通过对粗糙链孢霉的赖氨酸缺陷型和野生型杂交所得后代的表现型的分析，了解顺序排列的四分体的遗传学分析方法，进行有关基因的着丝粒距离的计算和作图。

三、实验材料

1.粗糙链孢霉野生型菌株，Lys ，接合型α。

2.粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株，Lys^-，接合型a。

四、实验器具和药品

1.器具：显微镜，钟表镊，解剖针，接种针，载玻片，试管，培养皿。

2.培养基

（1）基本培养基（野生型可生长，缺陷型不能生长）：50倍浓度的贮存液

用前稀释贮存液，再加1.5％的蔗糖，pH5.8。如加2％琼脂，即成基本固体培养基。

（2）补充培养基：在基本培养基上补加一种或多种生长物质，如氨基酸、核酸碱基、维生素等。

氨基酸用量一般是100毫升基本培养基中加5—10毫克。

本实验所用的补充培养基只要在基本培养基中加适量的赖氨酸，赖氨酸缺陷型菌株就能生长。

（3）完全培养基

（为获得大量分生孢子，可用1％的甘油代替蔗糖。）

如加2％琼脂，即为完全固体培养基。

（4）麦芽汁培养基：可以代替完全培养基，配方简单。8波美麦芽汁2份，蒸馏水1份，再加2％琼脂。

（5）马铃薯培养基：也可以代替完全培养基。将马铃薯洗净去皮，切碎，取200克，加水1000毫升，煮熟，然后用纱布过滤，弃去残渣，滤下的汁加2％琼脂，20克蔗糖，煮融，分装到试管中。也可将马铃薯切成黄豆大小的碎块，每支试管放3—4粒，再加入融化好的琼脂、蔗糖。

上述培养基都需分装到试管后，在8磅压力下消毒30分钟，取出斜摆，成为斜面备用。

（6）杂交培养基：

（7）杂交培养基：

将玉米在水中浸软，破碎，每试管放2—3粒，加入少量琼脂（0.1克左右），再放入一小片经多次折叠的滤纸（长约3—4厘米），加上棉塞，消毒即成，不需摆斜面。

3.药品：5％次氯酸钠（NaClO），5％石碳酸

五、实验步骤

1.菌种活化：为使菌种生长得更好，先要进行菌种活化。把野生型和赖氨酸缺陷型菌种从冰箱中取出，分别接在两支完全培养基试管斜面上，28℃温箱培养5天左右。培养到菌丝的上部有分生孢子产生。

2.杂交：接种亲本菌株，可采用下述方法。

（1）同时在杂交培养基上接种两亲本菌株的分生孢子或菌丝，25℃温箱进行混合培养。注意要贴上标签，写明亲本菌株及杂交日期。在杂交后5—7天就能看到许多棕色的原子囊果出现，以后原子囊果变大变黑成子囊果，在7—14天左右，就可在显微镜下观察。

（2）在杂交培养基上接种一个亲本菌株，25℃培养5—7天后即有原子囊果出现。同时准备好另一亲本菌株的分生孢子，悬浊于无菌水中（近于白色的悬浊液），将此悬浊液加到形成原子囊果的培养物表面，使表面基本湿润即可（每支试管约加0.5毫升），继续在25℃培养。原子囊果在加进分生孢子1天后即可开始增大变黑成子囊果，7天后即成熟。