大肠杆菌营养缺陷型菌株的筛选
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  • 大肠杆菌营养缺陷型菌株的筛选

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-04-09    本站论坛
生理盐水,离心洗涤三次,加生理盐水到原体积。

3)吸取经离心洗涤的菌液0.1毫升于5毫升无N基本培养液,37℃培养12小时。

4)培养12小时后,按1∶1加入2N基本培养液5毫升,称取青霉素钠盐,使青霉素在菌液中的最终浓度约为1.000单位/毫升,再放入37℃温箱中培养。

5)先从培养12、16、24小时的菌液中各取0.1毫升菌液倒在两个灭菌培养皿中,再分别倒入经融化并冷却到40-50℃的基本及完全培养基,摇匀放平,待凝固后,放入37℃温箱中培养(培养皿上注明取样时间)。


4.缺陷型的检出:

1)以上平板培养36—48小时后,进行菌落计数。选用完全培养基上长出的菌落数大大超过基本培养基的那一组,用接种针挑取完全培养基上长出的菌落80个,分别点种于基本培养基与完全培养基平板上,先基本后完全,依次点种,放37℃温箱培养。

2)培养12小时后,选在基本培养基上不生长、而在完全培养基上生长的菌落,再在基本培养基的平板上划线,37℃温箱培养,24小时后不生长的可能是营养缺陷型。

5.生长谱鉴定:

1)将可能是缺陷型的菌落接种于盛有5毫升肉汤培养液的离心管中,37℃培养14—16小时。

2)培养16小时后,离心(3500转/分)10分钟,倒去上清液,打匀沉淀,然后离心洗涤三次,最后加生理盐水到原体积。

3)吸取经离心洗涤的菌液1毫升于一灭菌的培养皿中,然后倒入融化后冷却至40—50℃的基本培养基,摇匀放平,待凝,共做两皿。

4)将2只培养皿的皿底等分8格,依次放入混合氨基酸(包括核苷酸),混合维生素和脯氨酸(加量要很少,否则会抑制菌的生长),然后放37℃温箱培养24—48小时,观察生长圈,并确定是哪种营养缺陷型(见图13-1)。

六、实验结果记录

1.诱变处理的记录:

2.生长谱鉴定的记录:

你所鉴定的缺陷型是哪种缺陷型,生长圈在哪个区。


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