| 3）液体完全培养基（肉汤培养基）：牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl0.5克，蒸馏水100毫升，pH7.2，高压灭菌15磅/英寸215分钟。
（4）半固体培养基：琼脂0.7—1克，蒸馏水100毫升，pH7.0，高压灭菌15磅/英寸215分钟。
四、实验说明
大肠杆菌中除了不同型细胞的接合外，同型细胞F 与F 或*即浓度为使用浓度的50倍。
**将称好的药品分别溶解于670毫升蒸馏水中，待一种药品溶解后再放另一种药品，直至全部药品都溶解，然后加水定容到1.000毫升。
***琼脂的添加量由1.5—2克，根据琼脂的质量而定。凝固性能好的琼脂，可少加一些，反之，则要多加一些。Hfr与Hfr也能接合，但重组频率很低。细胞中的F因子使细胞壁的抗原发生了变化，这些不同于F性菌毛的表面成分阻止了F 与F 细胞杂交。经培养后处于饥饿条件下的F 细胞丧失了它们的表面排斥性，才能与其它F 细胞接合（这种改变是暂时的，一旦在新鲜培养基中，继续生长正常的表面特性又恢复），这些表型上的“F-细胞”称为拟表型。在抑制新的F性菌毛和表面成分形成的条件下生长，如低温下连续通气培养24—48小时，能增加拟表型的百分数。
1946年Lederberg和Tatum开始发现细菌的接合以后，普遍认为DNA的转移必需F （Hfr）与F-细胞的紧密接触。Anderson等于1957年根据电镜照片指出接合细胞之间形成了桥。之后发现F （Hfr）和性菌毛之间的关系，认为细菌染色体和专一雄性噬菌体通过性菌毛而转移。近来的电镜照片已经发现接合细胞通过性菌毛接触，并有实验依据。细胞接合后，供体中的DNA开始合成。一个单链DNA转移入受体并合成一条新的互补链；这过程能以DNA复制的滚环模型来说明。
上面提到带有F因子的大肠杆菌有F 和Hfr二类，实际上并不是所有的Hfr全是相当稳定的，在许多Hfr群体中含有回复子，在这些回复子中F因子不再整合在染色体上，而回复到游离状态，当F因子脱离寄主染色体时携带了细菌的基因，例如lac和gal等，这称之为F′因子。带有F′因子的菌称为F′菌株。F′菌株也能与F-杂交，现被广泛应用于细菌的研究工作。
五、实验步骤
1.菌液制备：
（1）实验前14—16小时，从冰箱保存的斜面菌种，挑少量菌于盛有5毫升完全液体培养基的三角烧瓶中；每一个菌株接种一瓶，共接种4瓶，置37℃培养过夜。
（2）取出培养过夜的细菌，在W1177一瓶菌液中加入5毫升新鲜的完全培养液，充分摇匀，等量分成2瓶；其余3瓶菌液分别用灭菌的5毫升吸管，各吸出2.5毫升菌液，然后再各加入2.5毫升新鲜的完全培养液，充分摇匀，各菌于37℃继续培养3—5小时。
（3）自温箱取出三角烧瓶，分别倒入离心管，菌株W1177倒二支离心管，其余菌株各倒入一支离心管，离心沉淀，3，500转/分，离心10分钟。
（4）倒去上清液，打匀沉淀，加入无菌水，离心洗涤3次，再加无菌水到原体积。
2.杂交——混合培养：
（1）取12支灭菌试管，每支吸入3毫升经融化的半固体培养基，并保温在45℃（保温温度不宜高，北方气温低，可降低半固体中的琼脂量）。
（2）12支试管分成三个杂交组合，即W1177×K12pro；W1177×W1485；W1177×HfrC。每个组合各4支试管，其中2支对照，2支混合菌液。
（3）对照组试管各吸F 或Hfr供体菌菌液1毫升，其余按杂交组合各吸供体菌和受体菌菌液0.5毫升，充分混匀。
（4）将各试管中含菌的半固体倒在有Vogel培养基底层的平板上，摇匀待凝，放37℃培养，48小时后观察（图12－3）。
六、实验结果记录
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