网站地图	本站论坛
高级搜索	收藏本站

热门关键字：　细胞培养　 pcr 　琼脂糖凝胶电泳　质粒DNA的提取　凝胶加样缓冲液　 PCR inventor

	当前位置：试验方案>实验基础>基础知识> 正文

DNA分子标记技术基因克隆技术

点击： 作者： 来源：基因酷 时间： 2007-10-24 　本站论坛

4 克隆子的进一步鉴定
用上述方法筛选的克隆子，难免得到一些假的克隆子。为进一步鉴定克隆子的真假，可采用限制性内切酶分析、分子杂交、PCR扩增和DNA测序等方法。
4.1 限制性内切酶分析法
这是一种最简单也是最常用的方法，从克隆子提取DNA，经凝胶电泳检测，若出现外源DNA带，可初步认定是克隆子；在此基础上，回收外源DNA，根据实验设计选用一些限制性内切酶切割，进一步用凝胶电泳检测，如果检测结果同原来用于转化的外源DNA被这些酶切割的结果一致，则可以认为是真的克隆子。
4.2 分子杂交法
根据实验设计，先制备含目的基因的DNA片段的探针，随后采用斑点杂交或DNA印迹（southern blotting）等方法进行鉴定。
4.3 PCR法
根据含目的基因两端或两侧已知核苷酸序列，设计合成一对引物，以待鉴定克隆子的总DNA为模板进行扩增，若获得特异性扩增DNA片段，表明待鉴定的克隆子含有目的基因，是真的克隆子。
4.4 DNA测序法
可以帮助了解目的基因的核苷酸序列在一系列操作过程中是否发生了变化。
4.5 目的基因转录产物检测
可以检测目的基因能否在受体细胞内进行有效的转录。常用RNA印迹（northern blotting）法检测。
4.6 目的基因翻译产物的检测
基因最终表达产物是蛋白质（酶），因此检测蛋白质的一些方法可用于检测目的基因的表达产物。最常用的是蛋白质印迹（western blotting）法。

上一篇：GenBank数据库简介下一篇：RNA提取一般步骤总结

共3页: 上一页 [1] [2] 3 下一页

推荐专题

↑返回顶部打印本页关闭窗口↓

　本站申明

　联系我们

Optimized to 1024x768 to Firefox,Opera and MS-IE6