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核酸抽提

点击： 作者：51protocol收集 来源： 时间： 2007-05-28 　本站论坛

核酸抽提

最糟糕的心态 - 实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂？

最糟糕的知识 - RNase A 的作用。RNase A 是内切酶，内切酶的作用结果是产生片段，而不是单个核苷酸，所以，RNase A 作用于 RNA 的结果是：大的 RNA 变成小的 RNA。为什么不同批次或者不同公司的 RNase A 消化 RNA 的结果不一样呢？因为 RNase A 的纯度不同：RNase A 纯度越高，则RNA 残留的片段就越大！事实上，RNase 的粗制品去除 RNA 的效果是最彻底的，但现在几乎没有公司销售了，可能的原因，一是生产粗制品成本更高，二是其中的杂质可能对 DNA 的完整性有影响。

最糟糕的试剂 - 水。水是所有实验都必须用到的试剂，但却没有人将她当做试剂。复旦的蒸馏原水肯定可以养鱼，因为一周就会出现蓝藻。涉及到酶反应的水，最好用去离子水。

最糟糕的仪器 - 分光光度仪 (核酸分析仪)。太精密，也太集成，使用者在它们面前非常弱势，又不甘于弱势，于是就坚信该仪器的结果；生产商再推出更简洁的设计，到今天，分光光度仪 (核酸分析仪) 真的成为傻瓜仪了。常识告诉我，越是精密的东西，其对外界干扰的反应越激烈。我也没有搞懂这个东西，只是知道：给它配一个稳压电源；将它的家安在震动最小的地方 - 决不与离心机同台；如果出现了不可解释的结果，宁可相信仪器在发脾气。

最糟糕的操作 - 去除离心管中的溶液。将离心管中的液体倒掉，能倒得多彻底？不同的离心管会有不同，但残留量绝对会出乎想象的。该操作是如此的常见，强烈建议自行实验看一看：在下次做核酸抽提时，75% 乙醇洗涤后离心，倒掉乙醇，再将离心管置于离心机短暂离心，看一看有多少残留液体。不要以为乙醇会挥发就无所谓，盐可不会挥发。常规实验之所以难做到 100% 顺利，其原因就在于没有消除前面的隐患 – 隐患者，偶尔为之是也。

最糟糕的遗忘 - 产品目录。知名公司的产品目录绝对是一个宝库。知名公司产品目录中的知识，其可靠程度远远大于参考书。当“分子克隆”与 Sigma 关于某一问题的解释矛盾时，我选择 Sigma 的解释。知名公司似乎深谙一点：在研究人员眼里，他们的知识错误更易被解释为欺骗，而参考书中的错误，我们是会宽容的；同人相轻，但只是人民内部矛盾，而与公司之间是敌我矛盾。

最糟糕的懒惰 - 苯酚的 pH 值测定。“分子克隆”、Sigma、Invitrogen 都有关于 Tris 饱和苯酚的 pH 值的判断方法： “分子克隆”测酚相，Sigma 测水相，Invitrogen 测稀释的酚相。同一瓶 Tris 饱和苯酚，用这三个方法 (pH 试纸) 测定的结果是什么样的？新版“分子克隆”改掉了上一版关于 RNase A 灭活 DNase 操作的错误，下一版应该会改掉关于测定苯酚 pH 值的错误吧。

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