网站地图	本站论坛
高级搜索	收藏本站

热门关键字：　细胞培养　 pcr 　琼脂糖凝胶电泳　质粒DNA的提取　凝胶加样缓冲液　 PCR inventor

	当前位置：试验方案>实验基础>基础知识> 正文

蛋白酶 K的妙用

点击： 作者：51protocol收集 来源： 时间： 2007-05-28 　本站论坛

蛋白酶 K的妙用

蛋白酶 K，威力巨大的广谱蛋白酶，95C 加热10 分钟，则完全失活。数年前首次使用它，是替代 DEPC 处理 RNA 抽提用的离心管和枪头，效果不错；后来又用于处理 RNase-Free的水，效果也是一级棒。从此就再也不用 DEPC 了。现在将它的细节公开，与大家分享。配制 RNA 裂解试剂时，直接用灭菌的双蒸水配制，最后，加入蛋白酶 K 至终浓度 1ug/ml。轻轻混匀，室温放置 15 分钟后即可。枪头及离心管去除 RNase：先将枪头及离心管清洗干净后，移入预先混好的含 1ug/ml 蛋白酶 K 的双蒸水，彻底浸入。室温放置 30 分钟后，连水一起高压灭菌。弃水后，烘干即可。RNase-Free 水的获得：直接在灭菌的双蒸馏水中加入蛋白酶 K 至终浓度 1ug/ml。轻轻混匀，室温放置 15 分钟后，灭菌处理即可。该蛋白质的残留对后续实验没有可见的影响。无蛋白质残留的RNase-Free 水的获得：这比较麻烦。直接在灭菌的双蒸馏水中加入蛋白酶 K 至终浓度 1ug/ml。轻轻混匀后，倒入专用的蒸馏器中。放置 15 分钟后，加热蒸馏，流出的就是无蛋白质残留的RNase-Free 水。要提醒的是，该专用蒸馏器头几次流出来的水，只能当普通蒸馏水用，因为通道中难确保 RNase-Free 的环境；另外，一定要主要密闭性，否则，流出的水又被污染了。蛋白酶 K: 价格 100元/25mg，可处理 25 升水。DEPC: 价格 >150元/5ml，可处理 5 升水。

上一篇：RNA 抽提中自备有机溶液的配制及保存问题下一篇：核酸抽提

推荐专题

↑返回顶部打印本页关闭窗口↓

　本站申明

　联系我们

Optimized to 1024x768 to Firefox,Opera and MS-IE6