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利用聚合酶链反应制备放射性标记的DNA探针
1. 在一个0.5 ml的薄壁微量离心管中设置下列扩增/放射性标记反应体系:
10×扩增缓冲液 5.0μl
10 mmol/L dNTP溶液 1.0μl
0.1 mmol/L dCTP 1.0μl
20μmol/L 正向寡核苷酸引物 2.5μl
20μM反向寡核苷酸引物 2.5μl
模板DNA(2~10 ng或约1 fmol) 5~10μl
10 mCi/ml[α-32P] dCTP (比活性3000 Ci/mmol) 5.0μl
水 加至48μl
在反应体系中加入2.5单位耐热DNA聚合酶。轻敲管壁以混合各组分。
2. 如果热循环仪无加热盖,可加一滴(50μl)轻矿物油或一粒石蜡于反应混合物之上,以防止样品在反复加热及冷却的循环中蒸发。将微量管放入热循环仪。
3. 通过变性、复性和聚合扩增样品,反应时间见下表。
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