• T4多核苷酸激酶末端标记

• 点击：    作者：   来源： 日期：2006-11-09    本站论坛

用T4标记的5’末端

1．无菌的1.5ml为了离心管置冰浴上顺序混合下列组分：

50 pmol合成的寡核苷酸

2.5μl 10×反应缓冲液

10μl γ-[³²P]ATP（33pmol）

1.5μl T4多核苷酸激酶（15U）

灭菌双蒸水加至25μl

2．37℃温育30min。

3．当反应物正温育时，以2000×g离心2min制备Sephadex G-25自旋柱。

4．加入2μl 0.5mol/L EDTA或加热至68℃ 10min终止反应。将反应混合物装至自旋柱并于2000×g离心4min。1μl柱洗脱液用液闪计数仪计数。