应用激酶交换反应的末端标记
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  • 应用激酶交换反应的末端标记

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2006-11-09    本站论坛

应用激酶交换反应的末端标记

1.在置冰浴中的1.5ml微量离心管内依次加入:

50 pmol合成寡核苷酸

2.5μl 10×反应缓冲液

1.5μl ADP(300μmol/L终浓度)

10μl γ-[32P]ATP(33pmol)

1.5μl T4多核苷酸激酶(15U)

蒸馏水加至25μl

2.37℃水浴温育30分钟。

3.加入2μl 0.5mol/L EDTA或加热至68℃ 10min终止反应。混合液经Sephadex G-25自旋转,离心(2000×g,4min),去除未掺入的核苷酸。用液闪计数计数1μl柱洗脱液。

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