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石蜡DNA提取

点击： 作者： 来源： 时间： 2006-11-09 　本站论坛

1.  取蜡块切片15-20张（8UM），置于EP管中，加入1ML的二甲苯，37度作用3小时，10000×3分钟，倾去二甲苯。重复3-4次，观察管壁是否光滑。若有蜡质残存，需继续脱蜡。
2.  剃度酒精水化：100% 1ML，室温30分钟，10000×3分钟，去上清；95%；75%；50%。
3.  消化：1×SSC 500UL ，洗涤沉淀，12000×3M离心。干燥沉淀后加石蜡消化液 400UL，20mg/ml的PK 20ul；55度消化120小时，至第四天，补加PK 10ul。
4.  消化后见液体清亮，肉眼见组织较少。将其转入98度的水浴箱煮沸10分钟，以灭活PK，置冰上迅速冷却，离心10000×5分钟。
5.  取上清加等量的酚-氯仿，轻颠倒混匀成乳白色，低温离心，14000×10分钟。小心取上清，再加等量的酚-氯仿，混匀，离心。
6.  取上清加冰无水乙醇两倍体积及1/10的乙酸钠（PH 5。2），颠倒混匀。置-20度半小时，14000×10分钟低温离心，去上清。
7.  沉淀用70%的乙醇洗涤2次，（加1ML，颠倒EP管数次，14000×5分钟，离心），自然干燥沉淀。
8.  加TE20ul，（含RNA酶），4度过夜。

20×SSC 配方：3mol/l Nacl ，0。3 M 柠檬酸三钠·2H2O ，用HCL调PH值至7。0
石蜡消化液：150nmol/l NacL：15mmol/l柠檬酸钠，1%SDS，PH 7。0。

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