分光光度法检测RNA浓度-试验方案

分光光度法检测RNA浓度
点击： 作者： 来源： 日期：2006-11-09 本站论坛

使用法玛西亚公司的DNA/RNA浓度测定仪，测定样品A260和A280值。根据A260/ A280比值，估测RNA质量。一般A260/ A280比值在1.8~2.0之间，可以满足实验要求。在100μl RNA原液中取1μl稀释至250μl（DEPC处理的水），测定样品的A260和A280的值，按下列公式计算其浓度：RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40（ng/μl）
测定 RNA浓度按以下步骤进行操作：
⑴ 取1μl RNA原液，放在0.5ml EP管中，加入249μl dd H2O，用移液枪反复混匀。
⑵ 用dd H2O为空白对照，调节A260零点。
⑶ 倒掉比色杯中的水，加入稀释并混合均匀的RNA样液，测定A260值。倒掉比色杯中的RNA样液，用dd H2O冲洗比色杯，再调节A280零点。
⑷ 倒掉比色杯中的水，加入稀释并混合均匀的RNA样液，测定A280值。计算A260/ A280比值，比值≥1.8，满足实验要求。
⑸ RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40（ng/μl）