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琼脂糖凝胶电泳法

点击： 作者： 来源： 时间： 2006-11-09 　本站论坛

1.仪器装置 电泳室及直流电源同纸电泳。
2.试剂
(1) 醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0) 取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH至3.0，再加水至1000ml。
(2) 甲苯胺蓝溶液取甲苯胺蓝0.1g，加水100ml使溶解。
3.操作
(1)制胶取琼脂糖约0.2g，加水10ml，置水浴中加热使溶胀完全,加温热的醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0)10ml，混匀，趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm或4cm×9cm)的玻璃板上，厚度约3mm，静置，待凝胶结成无气泡的均匀薄层，即得。
(2) 标准品溶液及供试品溶液的制备 照各药品项下规定配制。
(3) 点样与电泳 在电泳槽内加入醋酸－锂盐缓冲液(pH3.0),将凝胶板置于电泳槽架上，经滤纸桥浸入缓冲液。于凝胶板负极端分别点样1μl，立即接通电源，在电压梯度约30V/cm，电流强度1～2mA/cm的条件下，电泳约20分钟，关闭电源。
(4) 染色与脱色 取下凝胶板，用甲苯胺蓝溶液染色，用水洗去多余的染色液至背景无色为止。

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