PRINS步骤-试验方案

PRINS步骤
点击： 作者： 来源： 日期：2006-11-09 本站论坛

    1、常规脱蜡浸入0.01mol/LPBS；
    2、用0.2mol/L盐酸处理5min；
    3、蛋白酶K(25μg/m1)消化37℃ 15min；
    4、分别用80％，95％和100％酒精脱水，室温干片；
    5、加PCR混合液25μL(10mmol/L Tris-HCl，50mmol/L KCl，1.5mmol/L MgCl2，各加200μmol/L dATP，dCTP，dGTP，1.5mmol/L dig-11-dUTP l.5μl，引物250ng，Taq DNA聚合酶2U)，加盖片；
    6、94℃变性5min后置入65℃湿盒中5min；
    7、用0.1×SSC液，65℃洗5min；
    8、片于65℃ 10s～20s；用4×SSC-0.1％吐温20液42℃洗5min，2次；
    9、经Buffer I液洗后滴加20％羊血清封闭30min；
    10、加地高辛抗体复合物(1:500)室温下2h；
    11、BufferⅢ液洗5min；
    12、用BCIP-NBT显色1h～2h，在镜下控制，终止显色；
    13、用中性红或核固红衬染，酒精脱水，二甲苯透明，树脂封片。