层析是广泛使用的分离蛋白质的方法，它是根据蛋白质的形态、大小和电荷的不同而设计的物理分离方法。凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等是目前最常用的层析方法。
■ 凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)
凝胶过滤层析法又称排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化(图2-42)。
图2-42 凝胶层析法
三种不同的蛋白质根据它们大小的不同在层析柱中被分离。
■ 亲和层析(affinity chromatography)
在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并结合，如酶与底物的识别结合、受体与配体的识别结合、抗体与抗原的识别结合，这种结合既是特异的，又是可逆的， 改变条件可以使这种结合解除。生物分子间的这种结合能力称为亲和力。亲和层析就是根据这样的原理设计的蛋白质分离纯化方法(图2-43)。
图2-43 亲和层析
(a)琼脂糖珠的表面吸附剂(如胰岛素配体)只能同特异的受体结合(胰岛素);(b)亲和层析的基本步骤。
■ 离子交换层析(ion-exchange chromatography)
离子交换层析的原理是什么？
离子交换层析是根据蛋白质所带电荷的差异进行分离纯化的一种方法(图2-44)。
图2-44 离子交换层析
通过DEAE-纤维素将两种不同带电性的蛋白质分离开。图中显示的是带正电的离子交换树脂结合带负电的蛋白。
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