诱变物质的微核测试
一、实验原理
微核（micronuclei）简称（MCN）是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的。我们科研工作证实，整条的染色体或好几条也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以许多人认为可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们很需要有一套高度灵敏，技术简单的测试系统来监视环境的变化。只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。目前国内外不少部门已把“微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
现有的微核测试系统多数是用哺乳动物的骨髓细胞或外周血细胞。缺点是需要一定培养条件与时间、细胞同步化困难、微核率低，一般只在0.2％左右。近年来，有人采用高等植物花粉孢子利用它们天然的同步性作微核测试材料，取得良好的效果。其中马德修用一种原产于美洲的鸭跖草（Tradescantiapaludosa）（一种叶子狭长形的鸭跖草，目前我国许多地方已经引种），建立四分孢子期微核率计数（MCN-in-Tetrad）的测试系统，是近年来报导的较好系统之一。该系统用低剂量的化学药物处理或辐射处理，其微核率可达10％—67％。
二、实验目的
1.是了解微核测定的方法与意义。
2.为寻找新的测试系统或测定更多的环境因素。
三、实验材料
具有幼嫩花序的鸭跖草（长在温室中的鸭跖草都能现蕾开花，大田栽培花期也很长），剪取花序，每种处理重复3根。
四、实验器具和药品
1.培养液：Knop氏培养液：1000ml蒸馏水 磷酸二氢钾0.25g 硫酸镁0.25g 硝酸钙1.00g 硝酸钾0.25g 微量磷酸铁。
2.处理液：EMS（甲基磺酸乙酯），由培养液配成，50mmol/L，75mmol/L，100mmol/L，150mmol/L等各种处理浓度。NaN3（叠氮钠），由培养液配成，0.2mmol/L0.4mmol/L，0.8mmol/L等各种浓度。
DES（硫酸二乙酯）由培养液配成50mmol/L，100mmol/L，150mmol/L等各种浓度。
3.固定液：3甲醇：1冰醋酸
染色：改良碱性品红液（配法参看实验二十八）
实验用具：30ml三角烧瓶，剪刀，镊子，载玻片，盖玻片等。
五、实验说明
处在分裂过程中的细胞，对理化因素的处理是有一定敏感时期的。鸭跖草的花粉母细胞在减数分裂前期对药物作用较为敏感，所以要取幼嫩的花序进行试验。各个花序中间老、两边嫩，一般能找到具适合时期的花芽。前期造成的染色体损伤应经过24—30小时的培养，在四分体中以微核形式出现。处理过程中所产的落后染色体或落后染色体组也能在四分体中以较大形式的微核出现。大、小微核形成机制有所不同，此处均作染色体变化指标。
六、实验步骤
（一）各三角烧瓶中加入各种浓度的处理药物和Knop培养液。各种处理重复3瓶、并留3瓶Knop液作对照。
（二）剪取新鲜的鸭跖草花序，每瓶插入3根，24℃中光照培养30小时。
（三）培养的花序分瓶固定在3甲醇：1冰醋酸固定液中，48小时后转移到70％酒精中，可长期冰箱保存。
（四）取适当大小，处于四分孢子早期的材料，改良碱性品红染色压片观察（见实验二十八）。
七、实验结果
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