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全血细胞培养染色体技术常用试剂配制

点击： 作者：51protocol收集 来源： 时间： 2007-06-02 　本站论坛

一、国内实验室应用试剂配制

（一）培养液

（1）RPMI1640培养液：称取RPMI培养基9.8g，碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节 pH7.2～7.4无菌过滤冻存备用。

（2）小牛血清商品：成都生物制品厂。

（3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重庆药检所）。

（4）pH调整液：5% NaHCO3溶液高压灭菌（8磅15min），0.1N稀盐酸液100ml。

（5）秋水仙素：10mg/ml无菌过滤高压灭菌（8磅10min）。

（6）磷酸缓冲液：pH7.4。

磷酸氢二钠28.8g(H2O)、磷酸二氢钾2.67g(无水)，溶于1000ml双蒸水中，加肝素，终浓度为100u/ml。

（7）Giemsa染色液：

Giemsa粉剂　　　　　　　　　　　1g

甘油　　　　　　　　　　　　　　66ml

在研钵中，加入少量甘油油仔细研磨然后放甘油全部加磨，60℃温箱中保温2h，冷却后加入甲醇66ml。装入有色瓶中混合待用。染色时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍，随配随用。

（二）固定液

（1）甲酸：冰乙酸3：1混合即用。

（2）PBS缓冲液配制：

NaCl　　 16g　　 Na2HPO4(12H2O) 　　5.65g

KCl　　　0.4g 　KH2PO4　　　　　　　　0.4g

加双蒸水至1000ml pH7.0。

取5%胰酶（生理盐水配制）1ml加入50ml PBS液中（最终浓度为0.025%），4℃冰箱待用。

二、细胞培养（Bhatl B和McGee JOD,1990）

1．完全培养基

RPMI　　　　　　　　　　　　 76.0ml

胎牛血清　　　　　　　　　　20.0ml

植物凝集素　　　　　　　　　 2.0ml

抗生素/抗菌素溶液（100

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