为了对以个特定序列进行PCR做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出.
1、样品准备区
这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采
取预防措施：
1）PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。
2）组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。
3）用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。
4）DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作，以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。
5）大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。
6）管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生，而且管子不能用力崩开，这样会产生气溶胶。
7）任何时候都应该穿实验服和带手套，手套要经常更换，尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间，经常清洗。
2、样品准备和RNA-PCR
RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题，反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
3、前PCR区
必须有专门用于准备各种反应的区域，这个区域必须保持干净，而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备，特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
4、PCR实验室试剂的操作
1）所用的所有溶液都应该没有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。
2）所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的－新鲜蒸馏的去离子水，用0.22
上一篇：PCR应用中存在的问题 下一篇：在检验医学领域要正确认识和使用PCR
