聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳-试验方案

试剂	分离胶（ml）	浓缩胶(ml)
1 2 5 蒸馏水 3 4	1.25 2.5 - 6.195 0.05 0.005	- 1.0 1.25 7.64 0.10 0.005
总体积（ml）	10	10
Aa浓度（g%）	7.5	3.0

【实验操作】

1.凝胶柱的制备
取l0cm×0.6cm的玻璃管，选择较平整的一端为底端，量取7.5cm、8cm两处，画线；底端管口用小块胶布封口，插入橡皮垫中，垂直放置于试管架中。用巴斯德滴管吸取分离胶，缓慢贴壁加胶到管内7.5cm处，立即加蒸馏水至8cm处。待分离胶凝固后，将胶面上的水分甩掉，残留的水分用滤纸条吸干，用滴管速加浓缩胶到分离胶面上至8cm处，再小心地加一层覆盖水。

2.安装电泳槽
选择无气泡、无裂缝、长度合适的小玻璃管，撕掉胶布，安装到电泳仪上，注意要紧密，以防止上槽缓冲溶液漏液；向下槽注入电极缓冲液，注意用弯头滴管除去玻璃管下端的气泡；再向上槽倒入电极缓冲液淹没小管，同样用滴管除去气泡。

3.加样
用微量注射器取样品液30μl，沿壁加在浓缩胶面上，注入时要慢，避免激起电极缓冲液。

4.电泳
连接电极，上槽与负极相连，下槽与正极相连；调节电流为lmA／管，待示踪染料进入分离胶时调节电流为2mA／管，待示踪染料接近凝胶管底部约0.5cm处，切断电源，电泳时间为2小时~3小时。

5.剥胶
取下凝胶管，用局麻针头注射器吸取一定量的蒸馏水，将针头插入胶柱-与管壁之间，边注水边旋转玻管，直至胶柱与管壁分开，然后用洗耳球轻轻在玻管的一端加压，使凝胶柱从玻管缓慢滑出，将凝胶柱置于编号的试管内，用蒸馏水冲洗几次。