DNA电泳上样量的控制
在分析性电泳中，一般样品投入量达50～100ng/带即可观察到清晰结果，而对于珍贵DNA样品则上样量达电泳的最低分辨率5～10ng/带也可。而对于一定量的DNA，当电泳时采用较薄的梳子制胶，则电泳时DNA条带相对较窄，观察较清晰；而随着电泳时间的延长，由于DNA分子本身有一定的扩散，电泳条带也会变浅。
对于染色体DNA的酶切片段包含各种大小的条带，上样量即使超过10mg条带也不会托尾，而单一条带（>10 kb）当上样量超过200ng就有可能产生托尾现象。
DNA电泳的标准分子量
目前各厂商开发了各种类型的标准分子量，有广泛用于PCR产物鉴定的小分子Marker，也有常规用的大分子Marker，图2-1为TAKARA公司提供的DNA标准分子量电泳（示意）图
图2-1 常用的DNA标准分子量电泳图
2.2 试剂与器材
1. 试剂
（1）50×TAE电泳缓冲液
242.0g Tris碱
100ml 0.5mol/EDTA（pH=8.0）
57.1ml 冰醋酸
（2）EB母液（1mg/ml）
称取一定量的EB溶于无菌水中，室温避光保存
凝胶中浓度为0.5mg/ml
EB为强诱变剂，实验中要防止污染
（3）DNA标准分子量（自制）
片段大小依次为：0.5，1.1，1.6，2.7，3.1，4.1，5.4，9.4和17
单次电泳电样量3～4ml即可，回收电泳加倍
（4）10×Loading buffer（pH7.0）
EDTA 50mM
甘油 60%
Xylene Cyanol FF（W/V） 0.25%
Bromophenol Blue（W/V） 0.25%
（5）无菌双蒸水
（6）琼脂糖
2. 器材
（1）eppendorf管
（2）枪头
（3）移液器
（4）电泳槽
（5）电泳仪
（6）微波炉
（7）电泳板和梳子
（8）紫外投射分析仪
（9）数码相机（带紫外滤色镜和近射镜）
实验步骤
(1) 用1×TAE–Buffer按照被分离DNA分子的大小配制一定浓度(0.7%)的琼脂糖凝胶50ml，在微波炉中加热至琼脂糖溶解。
(2) 待溶液冷却至50℃左右，加入溴化乙锭（贮存液: 用水配制为1mg/ml）至终浓为0.5mg/ml充分混匀。
(3) 用透明胶封固玻璃板两头，在距底板0.5~1.0mm的位置上放置梳子，将温热的琼脂糖凝胶倒入胶模中，凝胶厚度在3~5mm之间。
(4) 在凝胶完全凝固后，撕去透明胶，小心地将玻璃板移至装有1×TAE缓冲液的电泳槽中，轻轻地拔去梳子，且使缓冲液没过胶面约1mm。
(5) DNA样品与10×Loading-buffer(含有溴酚蓝和甘油等物质)混合后，用微量取样器慢慢将混合物加至样品槽中。
(6) 盖上电泳槽并通电，使DNA向阳极（红线）移动，采用电压为80～100V。
(7) 溴酚蓝在凝胶中移出适当距离后切断电流，取出玻璃板，在紫外灯下观查凝胶。
（注：对于DNA片段回收的电泳一般建议采用0.6%低浓度的凝胶，而且采用的电泳液需第一次使用，电泳槽要洗净）
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