等电聚焦[IEF]电泳技术
（四）其他电泳技术
⒈IEF/SDS-PAGE
双向电泳法 1975
年O
′Farrall
等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了IEF/SD S-PAGE
双向电泳。其中IEF
电泳（管柱状）为第一向，SDS-PAGE
为第二向（平板）。在进行第一向IEF
电泳时，电泳体系中应加入高浓度尿素、适量非离子型去污剂NP-40
。蛋白质样品中除含有这两种物质外还应有二硫苏糖醇以促使蛋白质变性和肽链舒展。
IEF
电泳结束后，将圆柱形凝胶在SDS-PAGE
所应用的样品处理液（内含SDS
、β-
巯基乙醇）中振荡平衡，然后包埋在SDS-PAGE
的凝胶板上端，即可进行第二向电泳。
IEF/ SDS-PAGE
双向电泳对蛋白质（包括核糖体蛋白、组蛋白等）的分离是极为精细的，因此特别适合于分离细菌或细胞中复杂的蛋白质组分。
⒉毛细管电泳 Neuhoff
等人于1973
年建立了毛细管均一浓度和梯度浓度凝胶用来分析微量蛋白质的方法，即微柱胶电泳，均一浓度的凝胶是将毛细管浸入凝胶混合液中，使凝胶充满总体积的2/3
左右，然后将其揿入约厚2mm
的代用粘土垫上，封闭管底，用一支直径比盛凝胶的毛细管更细的硬质玻璃毛细管吸水铺在凝胶上。聚合后，除去水层并用毛细管加蛋白质溶液（0.1-1.0
μl
，浓度为1-3mg/ml
）于凝胶上，毛细管的空隙用电极缓冲液注满，切除插入粘土部分，即可电泳。
目前毛细管电泳分析仪的诞生，特别是美国生物系统公司的高效电泳色谱仪为DNA
片段、蛋白质及多肽等生物大分子的分离、回收提供了快速、有效的途径。高效电泳色谱法是将凝胶电泳解析度和快速液相色谱技术溶为一体，在从凝胶中洗脱样品时，连续的洗脱液流载着分离好的成分，通过一个连机检测器，将结果显示并打印记录。高效电泳色谱法既具有凝胶电泳固有的高分辨率，生物相容性的优点，又可方便地连续洗脱样品。
各电泳法，除另有规定外，照下述方法操作。
一、纸电泳法 1.
仪器装置 包括电泳室及直流电源两部分。 常用的水平式电泳室装置如图，包括两个电泳槽A
和一个可以密封的玻璃(
或相应材料)
盖B
；两侧的电泳槽均用有机玻璃（或相应材料）板C
分成两部分；外格装有铂电极(
直径0.5
～0.8cm)D
；里格为可放滤纸E
的有机玻璃电泳槽架F
，此架可从槽中取出；两侧电泳槽A
内的铂电极D
经隔离导线穿过槽壁与外接电泳仪电源相连。 电源为具有稳压器的直流电源，常压电泳一般在100
～500V
，高压电泳一般在500
～10 000V
。
2.
操作法 (1)
电泳缓冲液 枸橼酸盐缓冲液(pH3.0)
取枸橼酸 (C6H8O7·H2O)39.04g
与枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)4.12g
，加水4000ml
，使溶解。 (2)
滤纸 取色谱滤纸置1mol/L
甲酸溶液中浸泡过夜，次日取出，用水漂洗至洗液的pH
值不低于4,
置60℃
烘箱烘干，备用。可按需要裁成长27cm
、宽18cm
的滤纸，或根据电泳室的大小裁剪，并在距长度方向一端5
～8cm
处划一起始线，每隔2.5
～3cm
处做一记号备点样用。 (3)
点样 有湿点法和干点法。湿点法是将裁好的滤纸全部浸入枸橼酸盐缓冲液(pH3.0)
中，湿润后，取出，用滤纸吸干多余的缓冲液，置电泳槽架上，使起始线靠近阴极端，将滤纸两端浸入缓冲液中，然后用微量注射器精密点加供试品溶液，每点10μl,
共3
点，并留2
个空白位置。 干点法是将供试品溶液点于滤纸上，吹干、再点，反复数次，直至点完规定量的供试品溶液，然后用喷雾器将滤纸喷湿，点样处最后喷湿，本法适用于稀的供试品溶液。 (4)
电泳 于电泳槽中加入适量电泳缓冲液,
浸没铂电极，接通电泳仪稳压电源挡,
调整电压梯度为18
～20V/cm
，电泳约1
小时45
分钟，取出,
立即吹干,
置紫外光灯(254nm)
下检视，用铅笔划出紫色斑点的位置。 (5)
含量测定 剪下供试品斑点和与斑点位置面积相近的空白滤纸，剪成细条，分别置试管中，各精密加入
上一篇：核酸凝胶电泳观察法 下一篇：PCR技术：PCR扩增产物的电泳分析
共5页: 上一页 [1] 2 [3] [4] [5] 下一页
