本文由生物秀根据华东理工大学生物工程学院的酶工程课件整理而成
一、实验流程
二、实验安排
第1次 菌体超声破壁、离心、包涵体复性、 装离子交换柱
第2次 测酶活、定蛋白离子交换层析 层析样品进行浓缩、透析
第3次 浓缩、透析前、后样品测活、定蛋白 装分子筛柱
第4次 分子筛层析，并对收集样品进行测活、定蛋白等
第5次 对分离纯化各样品进行蛋白电泳分析，并绘出分离纯化表
三、实验操作
第1次： 菌体超声破壁、离心、包涵体复性、装离子交换柱
实验顺序：超声破壁→离心→装离子交换柱→平衡→包涵体复性
掌握要点：破壁原理
装离子交换柱方法
包涵体复性原理及方法
第2 次：测酶活、定蛋白、 离子交换层析分析 、 层析样品进行浓缩、透析
实验顺序：测酶活→上柱→梯度洗脱→定蛋白→紫外吸收测蛋白峰→酶活曲线测定→收集样品→ 浓缩 →透析 涉及单元实验：测酶活、定蛋白、 离子交换层析、浓缩、透析
掌握要点：碱性磷酸单酯酶测活原理
紫外吸收法绘蛋白浓度曲线方法
离子交换层析原理及方法
浓缩及透析常用方法
第3次：浓缩、透析前、后样品测活、定蛋白、装分子筛柱
实验顺序：浓缩透析前、后样品测活→考马斯亮蓝法定蛋白→装分子筛柱→平衡
涉及单元实验：测活、定蛋白、装分子筛柱
掌握要点：考马斯亮蓝法测蛋白浓度方法
装分子筛柱方法
第4次：分子筛层析，并对收集样品进行分析
实验顺序：测活样品进行分子筛层析→紫外吸收测蛋白峰--酶活曲线测定→考马斯亮蓝法定蛋白
涉及单元实验：破壁、离心、分子筛层析、复性
掌握要点：分子筛层析原理
对分离纯化各样品计算比活
第5次：对分离纯化各样品进行蛋白电泳分析， 并绘出分离纯化表
实验顺序：蛋白电泳，同时进行数据分析
涉及单元实验：蛋白电泳
掌握要点：掌握蛋白电泳方法
了解分离纯化样品纯度鉴定的各种方法
绘制酶的分离纯化表
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