仪器：Pharmacia公司IPG Phor系统
制备等电聚焦凝胶：
试剂：1）丙稀酰胺；2）双－丙稀酰胺；3）Immobiline II；4）过硫酸铵；5）TEMED
储存液：
1）溶解14.55g丙稀酰胺和0.45g N，N‘－双甲叉丙稀酰胺于40ml双蒸水中，溶解过滤后定容至50ml，4摄氏度可以存放2周。
2）Immobiline II，使用前将储存于4－8摄氏度的Immobiline II溶液于室温下平衡半小时。
3）固定化电解质的选择。固定化电解质可以分为酸性和碱性固定化电解质，分别含有一个弱的羧基和氨基，商品化的固定化电解质有6-7种，但是实验室已可合成不同pK值的丙稀酰胺衍生物17种，利用不同pK固定化电解质的组合可以配置不同pH范围的凝胶，甚至一个pH范围及小于一个pH范围的凝胶，现在已经可以从10种不同pK的固定化电解质中选择缓冲离子和滴定剂，设计pH2.5-12任意宽窄范围的pH配方，也有很多中pH范围商品化的固相pH梯度凝胶出售。
灌胶： 通常将酸性固定化电解质作为重液，碱性固定化电解质作为轻液，下表为凝胶配方：
表2 固相pH梯度凝胶配方
不同pH梯度范围加入的固定化电解质的量不同，参见下表 表3
