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抗体纯化－冷酒精沉淀法

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-11-11 　本站论坛

　　分离过程如下：
1. 血清加3倍体积的蒸馏水，调节 pH至7.7(±)冷却到0℃。在激烈搅拌的条件下，加预冷的酒精（-20℃）到最终浓度为20%，保持在-5℃。产生的沉淀（a），含有大多数种类的免疫球蛋白。
2. 沉淀a悬浮于25倍体积的0.15～20mol/l NaCl溶液（冷）中，加有0.05mol/l醋酸调节 pH到5.1，产生的沉淀（b），包括大部分的IgA和IgM，IgG留在上清液内。
3. 调节上清液的pH到7.4，加冷酒精（-20℃～-30℃）到最终浓度为25%，维持在-5℃。所得到的沉淀（c）含有90%～98% IgG。不同动物，IgG分离的条件和产量略有不同。见下表。
4. 从沉淀（b）可按下述方法进一步分离出IgA和IgM的混合物：将沉淀（b）悬浮在0℃ 水中，调节 pH到5.1，离心去除不溶的蛋白。调节上清液离子强度到0.01～0.0075,pH5.5。然后加冷酒精到最终浓度为10%，保持在 –2℃或-3℃低温，所得的沉淀（b-b）主要含IgA和IgM。
表从几种动物和人血清沉淀a分离IgM的条件

物种	pH	沉淀条件		IgG产量
物种	pH	酒精浓度（%）	离子强度	IgG产量
人	5.1	15.	0.01	65
山羊	5.2	0	0.01	65
家兔	5.2	10	0.01	70
大鼠	5.0	15	0.01	50
豚鼠	5.1	15	0.01	70

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