免疫细胞化学常用试剂－显色液

免疫细胞化学中，由于抗原-抗体反应所形成的复合物本身无色，无法直接观察，因而需借助于某些化学基团的呈色作用，使其得以显示，以利于在显微镜下观察。常用的显色液有：

　　1．DAB（Diaminobenzidine）显色液

　　DAB即3，3-二氨基苯联胺

　　试剂：DAB（常用四盐酸盐）　50mg

　　0.05mol/L TB 　　　　　　　100ml

　　30% H2O2　　　　　　　　　30～40μl

　　配制方法：先以少量0.05mol/L(pH7.6)的TB溶解DAB，然后加入余量TB，充分摇匀，使DAB终浓度为0.05%,过滤后显色前加入30%的H2O230～40μl，使其终浓度为0.01%。

　　DAB显色液主要用于免疫过氧化物酶法（如酶标法、PAP法等），其终产物可直接在光镜下观察，也可经OsO4处理后，增加反应产物的电子密度，用于电镜观察。但有几点需注意：DAB溶解要完全，否则未溶解的颗粒沉积于标本上影响观察；DAB浓度不易过高，否则显色液呈棕色，增加背景染色，另外DAB有致癌作用，故操作时应戴手套，尽量避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗，接触DAB的实验用品最好经洗液浸泡24h后使用。

　　2．4-氯-1-萘酚（4-Cl-1-Naphthol）显色液

　　配方1：4-Cl-1-萘酚 　　　　　　　　100mg

　　纯乙醇　　　　　　　　　　　　　　 10ml

　　0.05mol/L TB(pH7.6)　　　　　　　　190ml

　　30% H2O2　　　　　　　　　　　　 10μl(0.003%)

　　配制方法：先将4-Cl-1-萘酚溶解于乙醇中，然后加入Tb 19ml，用前加入30% H2O2使其终浓度为0.005%，切片显色时间通常为5～20min。

　　配方2：4-Cl-1-萘酚

　　N-二甲基甲酰胺（DMF）

　　0.05mol/L TB(pH7.6)

　　30% H2O2