| 细胞因子检测技术应用 | | 点击： 作者： 来源： 时间： 2007-11-14 本站论坛 |
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1． IL-2 目前多将IL-2与LAD/TIL合用治疗实体肿瘤，对肾细胞癌、黑色素瘤、非何杰金淋巴瘤、结肠直肠癌有较显著的疗效，应用IL-2（或与IFN合用）治疗感染疾病亦取得了一定疗效。
2． TNf 由于其全身应用副作用严重且疗效差，目前多倾向将其局部应用如瘤灶内注射治疗某些肿瘤和直肠癌，其确切疗效尚待进一步评价。
3． CSF 目前主要应用GM-CSF和G-CSF治疗各种粒细胞低下患者。例如与化疗药物合用治疗肿瘤可以降低化疗后粒细胞减少程度，使粒细胞的数量和功能能尽快回升并能提高机体对化疗药物的耐受剂量，从而提高治疗肿瘤的效果。对再生障碍性贫血和AIDS亦有肯定疗效。用于骨髓移植后可使中性粒细胞尽快恢复，降低感染率。此外，应用EPO治疗肾性贫血取得了非常显著的疗效。
（2） 细胞因子阻断和拮抗疗法
其基本原理是抑制细胞因子的产生和阻断细胞因子与其相应受体的结合及受体后信号传导过程，使细胞因子的病理性作用难以发挥。该疗法适用于自身免疫性病、移植排序反应、感染性休克等的治疗。例如抗TNF单克隆抗体可以减轻甚至阻断感染性休克的发生，IL-1受体拮抗剂对于炎症、自身免疫性疾病等具有较好的治疗效果。
3.细胞因子的检测
细胞因子检测是判断机体免疫功能的一个重要指标，因而具有重要的实验室研究价值，同时还可能在临床上有诸多实用价值、包括许多疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测等。但是，由于细胞因子在体内的含量甚微，给细胞因子的检测带来困维。目前细胞因子的主要检测方法包括：
（1） 依赖性细胞株
一些肿瘤细胞株必须依赖于细胞因子方能在体外增殖，如DTLL细胞株依赖IL-2；FDC-PL细胞株依赖于小鼠IL-3；TF-1细胞株依赖于人IL-3和人GM-CSF，因而可利用这些依赖细胞株检测相应的细胞因子。这种方法敏感性高，特异性也不错，但可异的是并非所有细胞因都能找到相应的细胞株，因而限制了它的应用。
（2） 功能检测
利用一些细胞因子的功能特性，可建立相应的活性测定方法，如干扰素的抑制病毒感染效应，肿瘤坏死因子对L929细胞的杀伤作用等。这样的方法敏感性高，但特异性不够，容易受一些扰因素的影响。
（3） 免疫测定
利用抗原抗体反应的原理，制备出抗细胞因子的单克隆抗体或多克隆抗体，可进行细胞因子的免疫检测。这种方法的优点是特异性强、操作简便，缺点是灵敏度不够，且不能代表活性测定的结果。从目前的国际发展趋势来看，已研制出了高灵敏度、特异性高、高度配套的细胞检测试剂盒，其应用范围正在扩大，有良好的发展前景。
（4） 功能测定与抗体抑制
为解决功能定特异性不够，免疫测定灵敏度不够的问题，可将两种方法结合起来，利用各自的长处，有可能得到较为可靠的结果。在这一方法中，所用的抗细胞因子抗体必须是具有中和活性的抗体。
（5） 分子杂交技术
利用分子生物学技术，制备出细胞因子的基因探针，可通过分子杂交技术检测细胞内细胞因子mRNA的表达，这是一种高度敏感和高度特异的检测技术，目前在实验室研究中使用较广，其缺点是操作较为繁琐，测定结果只能代表细胞因子基因的表达，而不能代表活性细胞因子的水平。
（6） 多聚酶链反应技术（PCR）
PCR（polymerase chain reation)技术是一种高效的基因体外扩增技术，目前PCR技术已用于细胞因子的检测中，首先将细胞因子产生细胞的RNA提取出来，再经逆转录合成cDNA，以cDNA为模板，在细胞因子引物的引导下，即可进行PCR扩增。这种技术是迄今最敏感的细胞因子检测技术，操作也较简便，缺点与分子杂交技术类似，并且不容易对细胞因子表达水平进行定量。
4.细胞内细胞因子测定法
本法测定的是细胞因子的前体分子；测定的是单一细胞行为。如前所述，除测经常表达和病理情况下亢进表达的细胞因子，可直接取样品细胞测定外，一般要用适当活化条件先活化细胞，使之合成欲测细胞因子。由于活化过程中加入蛋白质运输抑制物，如莫能菌素(monensin)和布雷菲尔德菌素A，阻止了细胞因子分泌，提高了阳性率。
荧光染色可用荧光显微镜检查，最好用流式细胞仪测定。其操作的大体步骤是：分离制备细胞、活化细胞、封闭细胞表面Fc受体、细胞表面抗原染色、固定和通透、细胞内细胞因子染色、流式细胞仪测定和结果分析。若用外周血测定，活化起始细胞一般用单个核细胞。活化T细胞除用抗原外，主要植物血凝素(PHA)、巴豆酯(PMA)、离子霉素（ionomycin）、钙离子载体A23187、T细胞受体抗体或CD3的抗体等；活化B细胞除抗原外，多用脂多糖（LPS）、金黄色葡萄球菌肠内毒素A及B细胞受体抗体；活化单核细胞用LPS和某些细胞因子。由于抗原活化效率低，多用多价活化剂和几种合用活化细胞，要根据测定目的选择。酶联免疫斑点法（enzyme-linked immunospot assay, ELISPOT）测细胞因子，在细胞分离制备、活化、固定和通透步骤与流式细胞仪法完全相同。 eLISPOT法引入生物素、亲和素放大系统后，灵敏度大为提高，在测定细胞因子产生阳性细胞频度方面，与流式细胞仪法平行。但后者可同时分析产生细胞性质和其他因子的产生情况，且结果更为客观。
细胞因子检测的主要临床应用有：
a) 机体免疫状态的评估；
b) 疾病预后及治疗监测指标；
c) 病理变化和损伤机理研究；
d) 辅助诊断。
细胞内细胞因子检测辅助性T细胞亚群，在临床上有重要应用价值。不同检测方法各有优点，各有局限，配合应用才能排除干扰，获得正确结论。
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