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胶体金制备方法及标记技术分类

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-11-14 　本站论坛

胶体金标记技术路线的选择
   (1)包埋剂根据抗原或标记底物性质决定包埋剂种类。
   蛋白类，推荐使用K4M；包埋后立即切片标记。
   外泌蛋白可选择spurr。可长期保存使用。
   细胞结构组分，如纤维素、b-1,3-葡聚糖、几丁质、多酚化合物等，可选择spurr。
(2)胶体金体积
   精细定位如病毒、细胞器定位等选用5 nm胶体金。
   细胞壁组分采用15-20 nm胶体金。
   多标记时，胶体金直径推荐选用6 nm、10 nm、15 nm；
   稳定抗原采用较大颗粒胶体金。一般蛋白标记采用10 nm。
(3)通用探针选择
   IgG-gold：-20°C可保存1年；但定位时胶体金距离标记位点较远，不适于精细定位。
   Protein A/G：-20°C可保存3个月；但定位时胶体金距离标记位点较近，适于精细定位和多标记。
   Protein A和Protein G与不同抗体之间的亲和性

抗体来源	IgG类型	与Protein A的亲和性	与Protein G的亲和性
人	IgG(正常)	++++	++++
	IgG1	++++	++++
	IgG2	++++	++++
	IgG3	－	++++
	IgG4	++++	++++
小鼠(mouse)	IgG1	+	++++
	IgG2a	++++	++++
	IgG2b	+++	+++
	IgG3	++	+++
大鼠(rat)	IgG1	－	+
	IgG2a	－	++++
	IgG2b	－	++++
	IgG2c	+	++
山羊(goat)	IgG	－	++
绵羊(sheep)	IgG	－／+	++
家兔	IgG	++++	+++
狗	IgG	++++	++++
猪	IgG	+++	+++
鸡	IgG	－	+
马	IgG	++	++++
豚鼠(guinea-pig)	IgG	++++	++
仓鼠(hamster)	IgG	+	++
猫	IgG	++++	－
小牛	IgG	++	++++

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