| 基本原理
先用抗原刺激机体，再用该抗原在体外刺激有关淋巴细胞，通过观察淋巴细胞转化情况评定机体的免疫功能。
材料和仪器
l 反应细胞：取自体内免疫后小鼠淋巴结的T细胞
l 抗原：1mg/ml 抗原溶于PBS
l 辅助细胞：经照射或丝裂霉素C处理后同系小鼠脾细胞（或非–T脾细胞）
l Freunds完全佐剂
l 96孔圆底或平底细胞培养板
l 3H-标记甲基胸腺嘧啶
l 100%乙醇
l 闪烁液
l 多孔收集器
l 玻璃纤维滤纸
l 液体闪烁计数仪
l 液闪管等
【操作步骤】
⒈ 免疫小鼠：制备抗原水溶液与Freunds完全佐剂的混悬液。若为引起淋巴结细胞的免疫应答，可经足垫免疫；若主要引起脾细胞免疫应答，可经腹腔免疫。皮下免疫后再经尾静脉免疫也是一条有效的免疫途径。细胞抗原可经腹腔免疫。需免疫2-3周才可进行体外试验。
⒉ 将抗原做4倍或10倍稀释，每孔加入30 ul蛋白质抗原。对照孔加入30 ul培养基。
⒊ 无菌取免疫后小鼠淋巴结和未免疫同系小鼠淋巴结，制成细胞悬液，并计数。
⒋ 每孔加入100 ul反应细胞。反应细胞最好为纯化后T细胞，否则可能会因非抗原特异细胞的增殖反应使对照值增高。若使用未分离的淋巴结细胞，每孔可加入1-2×106 细胞。
⒌ 每孔加入100 ul 5×106辅助细胞。
⒍ 37℃，5% CO2培养4-5天。结束培养前6-18h每孔加入0.5-1.0μCi[3H]-胸腺嘧啶。
⒎ 用细胞收集器将细胞收集在滤纸上，反复（至少10次）充吸培养孔，以保证DNA留在滤纸上，而未掺入的[3H]胸腺嘧啶被完全除去。100%乙醇处理以助于滤纸干燥。或静置过夜。
⒏ 将干燥的滤纸片加入液闪瓶，每瓶含5ml 闪烁液。
⒐ 液闪仪计数cpm值。
注意事项
⒈ 多数情况下，1×106/ml细胞浓度对多数刺激能产生良好的增殖反应。否则需预先滴定出合适的细胞浓度。当细胞浓度低时，改用96孔圆底培养板能提高增殖反应。
⒉ 细胞在培养前应具有良好的活力。
⒊ [3H]-胸腺嘧啶掺入时间长，会提高实验的重复性。每批实验时，应固定掺入时间和掺入量。
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