| 基本原理
将经SRBC免疫的小鼠脾细胞、SRBC（靶细胞）及补体一起混合于琼脂内，抗体形成细胞分泌的抗体在补体参与下；使其周围的SRBC溶解形成肉眼可见的溶血空斑，这种溶血空斑数大体上可以反映抗体形成细胞数。
材料与仪器
l SRBC保存液（Alsever液）；葡萄糖2.05g，氯化钠 0.42g，柠檬酸钠 0.8g，蒸溜水100ml，无菌过滤（Ｇ５漏斗）或8磅10分钟灭菌后备用。
l SRBC：在无菌条件下，自健康成年绵羊外颈静脉取血，置血液于有玻璃珠的三角烧瓶中轻摇10分钟以除去纤维蛋白，加人2 倍量的保存液，置4℃冰箱备用。临用时用生理盐水洗涤3次，经2000rpm10分钟得压积红细胞，再按所需浓度稀释。
l 100目尼龙网纱布
l Hank's液（见附录）
l 琼脂粉
l 0.4%台盼蓝
l 生理盐水
l 补体：新鲜豚鼠（至少3只）混合血清经SRBC（10:1）于4℃吸收30分钟后置-20℃以下备用。
l 戊二醛
l 37℃温箱等
操作步骤
1. 免疫：用 20％SRBC 0.2ml／只腹腔注射免疫小鼠。免疫后第 4天处死供实验。
2. 制备脾细胞悬液：脱颈处死经SRBC免疫的小鼠，立即剖取脾脏，在冰浴中，将脾置于100目尼龙网纱布上，加少许 Hank's液，轻轻挤压出脾细胞。细胞计数时用 0.4%台盼蓝染色观察活细胞应在90％以上。将脾细胞悬液配成107个／ml浓度。
3. 制备琼脂底层；平皿中加人用Hank’s液配成的溶化的1．4％琼脂2—3ml制备琼脂底层。
4. 加样：取脾细胞悬液和 5％SRBC各 0.lml及原补体 0.05ml混合加入保温于 45℃水浴的含0.4％琼脂糖0.8ml的试管中，摇匀后倒人平皿，旋转平皿使混合物均匀平铺于底层琼脂上，凝固后将平皿装人温盒并置37℃温箱中孵育3—4小时后计数PFC。如需保存，可加入生理盐水或PBS配制的0.25％戊二醛6ml加以固定。
5. 计算：以每106个脾细胞或整个脾脏所含的PFC数表示结果。
注意事项
PFC代表抗体产生细胞的数量，PFC的面积代表抗体的活性，讨论试验意义时应予以注意。
参考文献
巴德年 1998，当代免疫学技术与应用．北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社， 207～208
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