基本原理
体液或分泌物中溶菌酶活性可以通过检查其对指定敏感菌株的裂解作用来进行测定，将检品与菌液混合，用分光光度计观察指定时间内透光度改变的百分数反映溶菌酶的活性。
材料与仪器
l 菌种；溶壁微球菌（Micrococus Lysodeilicus）是从空气中分离出的一种革兰氏阳性球菌，菌落呈黄色，普通培养基上生长良好，１ 个月传代１次或冻干成菌种保存。
l PH6.4,1/15M磷酸盐缓冲盐水（ＰＢＳ）：
①1/15M磷酸二氢钾溶液：磷酸二氢钾9.04g,，加蒸馏水至1000ml。
②1/15M磷酸氢二钠溶液：磷酸氢二钠·2H2O11.87g，加蒸馏水至1000ml。
③PH6.4, 1/15M PBS： 1/15M磷酸二氢钾溶液73ml, 1/15M磷酸氢二钠溶液27ml，氯
化钠0.5g 混匀，溶解即成。
l 溶菌酶标准品：结晶纯品。
l 5N氢氧化钾：氢氧化钾56g加蒸馏水至200ml。
l 分光光度计
操作步骤
1. 菌液制备：将溶壁微球菌接种于普通琼脂斜面上，37℃ 培养 24一36小时．用 PH6.4、1/15M PBS洗下，配成混悬菌液。用分光光度计波长640nm测定，并调整其浓度达到透光率３０—40％。
2. 溶菌酶标准液：称取溶菌酶标准纯品，用PH6.4、l／15M PBS配成1000ug/ml原液，放冰箱保存。临用时再稀释成100、50、25及10ug／ml标准液。
3. 检品应根据估计溶菌酶含量作适当稀释．取适当稀释（或不稀释）检品0.2ml放小试管内。置37 ℃水浴箱预热5分钟，再向管内加人预热的菌液1.8ml混匀，立即记下开始时间，至2分钟时加入1滴5N氢氧化钾停止反应，立即将菌液倒入比色杯内．用640nm滤光板，0.5cm比色杯测其透光率T1%。
4. 另取同样浓度的检品 0.2ml．先加入 1滴 5N氢氧化钾摇匀，在37℃预热５分钟，再加入1.8ml经37℃预热的菌液，在同样温度下2分钟后同法测定其透光率Ｔ0。T１／一Ｔ0％为透光率差值，即溶菌酶所致透光率的变化，从标准曲线上可查得检品中溶菌酶含量。
5. 计算：以0.2ml各种浓度的溶菌酶标准液代替检品，操作步骤与待检品相同。以不同浓度标准液测得的透光率差值为纵坐标（ 对数坐标），溶菌酶浓度为横坐标，在半对数纸上绘制标准曲线。按检品的T％（2分钟的读数减去零时的读数）查出其对数，由标准曲线上查出稀释的检品中溶菌酶的含量，乘以稀释倍数，即为检品中溶菌酶的含量。
注意事项
溶菌酶是一种小分子蛋白质，存在于机体的泪液、唾液、痰、鼻涕、白细胞和血清等。测定它在体液或分泌物中的含量及其变动情况，可作为侧面了解机体防御功能一个指标。在选择标本及评价其意义时应予以注意。
参考文献
刘辉 2000 研究生免疫学教程 大连 大连出版社 260－261 上一篇：小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验 下一篇：溶菌酶测定法（平板法）
