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吞噬细胞吞噬功能检测（Assay

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 　本站论坛

一、基本原理
吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能，在机体固有免疫中发挥重要作用。小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠，可刺激巨噬细胞的聚集。四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液，一小时后解剖收集腹腔吞嗜细胞，染色、镜检可观察对羊红细胞的吞嗜现象。通过计算吞嗜百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞嗜功能。

二、材料
1. ICR品系小鼠（北京大学医学部实验动物中心提供）
2. PBS缓冲液
3. 3％硫代乙醇酸钠
4.羊红细胞（1％悬液，北京大学医学部实验动物中心提供）
5. 解剖器材、注射器、尖吸管、橡皮吸头、小试管及载玻片、
6. 瑞氏染液、甲醇

三、实验方法
1. 实验准备：用无菌注射器吸取3％硫代乙醇酸钠3ml，注射于小鼠腹腔内。
2. 四日后，注射羊红细胞（1％悬液）1ml于小鼠腹腔内。
3. 注射1小时后，将小鼠用颈椎脱臼法处死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用镊子轻轻夹起腹膜，将腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml预温的PBS，同时用手反复揉搓腹腔约1—2分钟，以便尽可能多地冲洗出小鼠腹腔的吞噬细胞。
4. 用尖吸管吸取腹腔液，置一洁净试管内。
5. 用尖吸管将腹腔液吹打均匀(尽量避免产生气泡)，吸取一滴滴于载玻片上，加盖玻片镜检。
6. 观察结果，也可以将腹腔液涂片，平放于湿盘内，37℃，孵育30分钟。取出涂片，用预温的PBS冲洗3次，然后用甲醇固定1分钟，以瑞氏染液1份加pH6.4的PBS 2份混匀后，滴于涂片上染色5-10分钟，以蒸馏水冲洗（切勿先将染液倾去）后，待干，镜检。

四、实验结果
观察小鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞对羊红细胞的吞噬现象，计算吞噬百分比，即每100个吞噬细胞中吞噬有羊红细胞的细胞数。也可用吞噬指数表示，即将100个吞噬细胞中所吞噬羊红细胞的总数除以100。吞噬百分比和吞噬指数一般是平行的。

五、注意事项
（1）充分揉搓腹腔，尽可能将吞噬细胞冲洗下来。
（2）用尖吸管吸取腹腔液时，尽量避开腹腔脏器，避免损伤血管引起出血，影响实验结果。
（3）用瑞氏染液染色时，切勿先将染液倾去后再冲洗，以免染液中细小颗粒附着于玻片上影响标本的清晰度

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