天然免疫功能测定
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天然免疫功能测定

点击:   作者:   来源:  时间: 2007-04-09  本站论坛

天然免疫是特异性免疫的基础,并参与和影响特异性免疫,因此检测机体天然免疫功能的状态,是评价机体免疫功能的重要组成部分。
一、中性粒细胞吞噬功能检测
中性粒细胞吞噬细菌的现象称为小吞噬现象,可以通过体外实验观察其吞噬细菌的情况并测定吞噬功能。
【材料】白色葡萄球菌18小时肉汤培养物、抗凝人血、小试管、玻片、吸管、毛细吸管、瑞氏染色液。
【方法】
1、用酒精棉球消毒耳垂后,取血4滴(约0.2ml),收集于肝素(50u/ml)抗凝管中,混匀。
2、加入白色葡萄球菌18小时肉汤培养物2滴(约0.1ml,12亿菌/ml)。
3、充分混匀,置37℃孵育10分钟后取出。
4、取—滴全血-白色葡萄球菌混合液置于洁净的载玻片上,推成薄血片,空气中自然干燥。
5、瑞氏染色:瑞氏染液数滴覆盖血膜,染1分钟,再加等量pH6.8 PBS与染液混合,染10~15分钟,注意勿使染液干涸。用蒸馏水冲洗,冲洗时平持玻片,在一端加水,使染料“漂”走。空气中自然干燥或滤纸印干。
6、油镜观察,可见中性粒细胞吞噬葡萄球菌。如染色正确,可见细胞核及被吞噬细菌染成紫色,而中性粒细胞的细胞浆则为淡红色。
【结果】观察100个中性粒细胞,分别记录吞噬细菌的中性粒细胞数和每个中性粒细胞吞入的细菌数。计算公式为:

二、巨噬细胞吞噬功能检测
巨噬细胞吞噬异物的现象又称为大吞噬现象。此试验通过检测巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用,了解巨噬细胞的吞噬功能。
【材料】小白鼠、灭菌肉汤培养基、1%鸡红细胞悬液、Hanks液、肝素、瑞氏染液。
【方法】
1、试验前一天,于小白鼠腹腔内注射灭菌肉汤培养基1ml。
2、试验当天,小白鼠腹腔内注入1%鸡红细胞悬液1ml,轻揉腹部,使鸡红细胞分散。
3、30分钟后,腹腔内注入Hanks液2ml,轻揉腹部,然后吸取腹腔液注入盛有1ml Hanks液(内含肝素10单位)试管中,37℃静置30分钟,1500转/分,离心10分钟。
4、取沉淀物作涂片,自然干燥,瑞氏染色,镜检。
【结果】
1、吞噬率(%):指每100个巨噬细胞中吞有鸡红细胞的巨噬细胞数。
2、吞噬指数:100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数除以100,即得吞噬指数,即每个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的平均数。
计算公式同上。
【附录】
1、瑞氏染液配制:
称取瑞氏染料0.1克,研磨于60ml甲醇中,过滤,贮褐色瓶中备用。
2、鸡红细胞悬液的制备:
用注射器由鸡心内取血数毫升,加于含枸椽酸钠溶液的试管中,摇匀,离心沉淀,沉淀的红细胞用Hanks液洗涤三次,配成1%浓度即成。



三、溶菌酶的测定
溶菌酶存在于吞噬细胞以及血清、泪液、唾液、痰、鼻腔分泌液等处,能水解G 菌细胞壁的肽聚糖成分,而致细菌崩解。测定溶菌酶在体液或分泌物中的含量及动态变化,可了解机体的防御功能。常用的测定方法为平板打孔法,用标准样品制备出标准曲线,便可测定标本中溶菌酶的含量。
【材料】混有微溶菌(M.Lysodeiktlcus)的1.5%琼脂平板、人的唾液(含有溶菌酶)、打孔器、针头、毛细吸管、量尺。
【方法】
1、微溶菌菌液的制备:菌种于使用前先在琼脂斜面上传代一次,然后再接种在琼脂培养基上,经37℃孵育24小时,用pH6.4 1/15M的磷酸盐缓冲液,将菌苔洗下,用比浊法使每毫升菌液含相当于2亿个菌。
2、称取1g优质琼脂加入PH6.4 1/15M磷酸盐缓冲液100ml中,加热溶解。取1ml菌液加到70℃已溶化之琼脂内,摇匀倾注平板,厚度为4mm。
3、用打孔器(直径6mm)打孔,再用针头挑去琼脂,打孔位置见图。


1、2、3、4、 分别加入唾液 5、 生理盐水

4、将唾液吐于空平皿中,用毛细滴管吸出滴入孔内(注意不要溢出,不要产生汽泡)。室温(24~26℃)放置24小时后观察结果。
【结果】
测量溶菌环直径,并作记录。溶菌环的大小与溶菌酶的含量成正比。
四、补体参与的反应
补体通过经典途径、旁路途径等被活化后,可在靶细胞上形成膜攻击复合物,造成靶细胞溶解。正常人血清中的补体含量相对稳定,某些疾病时可使补体含量发生变化,因此补体含量测定对于诊断自身免疫性疾病、免疫复合物引起的变态反应性疾病、补体缺陷病等都有一定的意义。
(一)免疫溶血反应
用红细胞免疫异种动物后,可获得IgG类的抗红细胞抗体。此类抗体与红细胞结合后,只出现凝集现象,但在补体的参与下,可使红细胞发生溶血,因而将这种抗红细胞抗体称为溶血素。所引起的红细胞溶解反应,称为免疫溶血反应。
【材料】2%绵羊红细胞悬液、2单位溶血素、2单位补体、试管、刻度吸管、37℃水浴箱。
【方法】
(1)取试管四支,编号,按下表加入各物:

试 管 号

1

2

3

4

2%绵羊红细胞悬液(ml
2u
溶血素(ml

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