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豚鼠T淋巴细胞的测定

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 　本站论坛

玫瑰花环试验，又称为花结试验。是测定淋巴细胞数量和功能的一种方法。
人类T和B淋巴细胞表面具有不同的受体。由于人类T淋巴细胞表面具有与绵羊红细胞结合的受体，能与绵羊红细胞非特异性结合，形成E花环，因此，T细胞也成为红细胞花瓣形成细胞。根据E—玫瑰花环形成率，可以间接判断机体细胞免疫力。目前，已广泛应用于临床，作为测定人群免疫状态的一个指标。
材料：
1.肝素（100单位/毫升）
2.0.5%兔红细胞悬液（用Hanks液配制）
3.吸收过的胎牛血清：
取经56℃30分钟加热灭活后的胎牛血清加半量压积兔红细胞混合后，37℃水浴20分钟，2000转/分离心10分钟，取上清液即成。
4.Hanks液
5.豚鼠抗凝血
6.淋巴细胞分层液
7.灭菌注射器，针头，试管，吸管等。
方法：
1.淋巴细胞提取
（1）取豚鼠抗凝血2毫升，加3毫升Hanks液使之稀释。加于3毫升淋巴细胞分层液液面之上（沿管壁轻轻加入，勿使两液相混）。
（2）2000转/分离心30分钟，吸淋巴细胞层到另一试管中加5倍体积的Hanks液洗1—2次，（1500转/分离心10分钟）弃上清即成。
1. 加吸收过的胎牛血清0.1毫升，0.5%兔红细胞悬液0.2毫升，于淋巴细胞中。混合后，37℃水浴5分钟。
2. 500转/分离心5分钟，放4℃冰箱中2小时后，弃大部分上清。
3. 染色及观察轻轻悬浮沉积的细胞。向悬液中滴一滴美兰液，混合，10分钟后取一滴放载玻片上，加盖玻片镜检。高倍镜或油镜下计数200个淋巴细胞，凡结合3个或3个以上的兔红细胞者为阳性，计算花环形成细胞的百分率。

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