抗原和免疫血清的制备实验
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抗原和免疫血清的制备实验

点击:   作者:   来源:  时间: 2007-04-09  本站论坛

抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫特异性的球蛋白。在免疫学实践,为制备抗体常以抗原性物质(细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质)给动物注射。经过一定时间后,动物血清中可以产生大量的特异性抗体。这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清。免疫血清不但对传染病的诊断、预防和治疗有重要意义,而且对器官移植,肿瘤以及某些科研工作也有重要意义。
抗体的产生通常与抗原的质和量、动物种类以及接种途径有密切关系。因此在制备免疫血清时要根据抗原的不同选择适宜的动物种类和免疫方法。
一.抗菌血清的制备
材料

1.动物:家兔
2.菌种:伤寒杆菌H901,伤寒杆菌O901
3.培养基:普通培养基
4.其它:0.5%甲醛盐水,0.5%石灰酸盐水,无菌生理盐水,标准比浊管,离心机。
方法:
1.抗原的制备:
标准菌株的选择:所用的菌种伤寒杆菌H901和伤寒杆菌O901应具有典型形态菌落及生化反应。在生理盐水中不发生自身凝集,与特异血清有高度凝集者可作为菌种。
2.菌液的制备
Ⅰ.原液制备:
H菌液的制备:将合格的伤寒杆菌H菌株接种于普通琼脂的克氏瓶或大试管内37℃孵育18—24小时。肉眼观察有无杂菌生长,必要时作镜检。用无菌甲醛生理盐水洗下菌苔,将洗下液体装入无菌试管内,置37℃恒温箱18—24小时以杀菌。得到原液。用作无菌试验即将菌液接种于肉汤及琼脂培养基培养4天,无活菌生长者才可使用。
O菌液的制备:将合格的伤寒杆菌H菌株依上法培养后,用无菌0.5%石灰酸盐水将菌苔洗下,洗液装入无菌试管置于37℃温箱中18—24小时杀菌得原液。经检查无菌时可以使用(如无伤寒杆菌O菌株也可用H菌株制备O抗原。即用0.5%石灰酸生理盐水洗下H菌菌液置100℃水浴60分钟,破坏其H抗原即为O菌液。

Ⅱ.应用液的制备:
合格的原液用标准比浊管计算含菌落数目后,用生理盐水稀释至每毫升含菌10亿。是为了应用液加入适量甲醛使其为0.25%,制备好的原液及应用液均保存在2—10℃冰箱中备用,有效期为1年。
菌液浓度的计算及稀释法:
菌液的浓度可用麦克法伦特氏标准比浊法来测定,方法如下:
(1)分别配制1%硫酸溶液及1%氯化钡溶液
(2)取口径相等质地相同的试管10支,依下表所示分别将硫酸及氯化钡溶液加入,封固管口,注明号码备用。

管号

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

1篊l2(ml)

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0. 9

1.0

1%H2

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