＋＋ ： 凝集的红血球平铺管底，呈沙撒布。分布不均匀，边缘不整齐。
＋ ： 凝集的红血球面积较小，凝集程度轻微。
－ ： 红血球形成小而光滑的圆点或有空心。
以“＋＋”为样品的滴度终点。
六、反向间接血凝检测猪传染性水泡病病原 （一）材料与试剂
1．高免血清 以猪传染性水泡病乳鼠毒苗免疫成年猪，10天后攻毒，攻毒后蹄部发生水泡。四星期后第二次攻毒，再过二星期，放血收集血清。
2．免疫球蛋白IgG的提取 以高免血清加等量0.01Mol/l pH 7.0 PBS,逐步滴加饱和硫酸铵液使成20％饱和，静置1h，滤纸过滤，滤液加饱和硫酸铵液使成50％饱和，静置1h，离心、沉淀，加 PBS至原血清容量。以33％饱和硫酸铵沉淀3次，最后沉淀以少量PBS洗下，透析，过Sephadex G
50，浓缩、透析，过DEAE－纤维素柱。洗脱液用0.0175Mol/L pH6.4PB液。收集
蛋白组成，测定蛋白含量。
3．双醛固定血球 绵羊红血球，以丙酮醛、甲醛固定，固定方法见本章第四节。
4．致敏血球 以1％血球悬液，IgG以130μg/ml～160μg/ml致敏为适宜。
5．标准抗原 水泡皮磨碎，以
生理盐水作1︰5～1︰10的稀释，置室温2h～3h，离心去上清。水泡液以1︰5稀释用。
6．健康猪蹄冠皮 猪口蹄疫水泡皮及水疱液。处理方法同上。
（二）操作方法
在有机玻璃板96孔V型底微量反应板上加稀释液，每孔一滴，每份样品两排孔，一排为测定孔，另一排为对照孔。以微量滴管取样品抗原材料。在测定排孔及对照排孔第一孔，各加一孔，顺序进行倍比稀释，每排最后一孔不加样品，作为空白对照。
在测定孔，加入稀释液一滴，在对照孔，加入高免血清（1︰100稀释）一滴。于微型振荡器上振荡，盖上薄片，置37℃条件下30min～60min。
在反应孔板上，每孔加入1％的致敏红血球悬液一滴，混匀置室温(25℃左右)2h左右，观察结果。
（三）结果判定
同第五节。
上一篇：免疫球蛋白轻链的检测 下一篇：免疫酶
共4页: 上一页 [1] [2] [3] 4 下一页
