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免疫组织化学技术常用试剂的配制

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-04-09 　本站论坛

①2%明胶（或25%阿拉伯胶水溶液） 60ml
②枸橼酸缓冲液（PH3.5） 10ml
③对苯二酚 1.7g加双蒸水至10ml
④硝酸银 50mg加双蒸水至2ml
①～③液用前依次混合，最后加入④液，注意避光。
⑵ 乳酸银显色液
①20%阿拉伯胶 60ml
②枸橼酸缓冲液（PH3.5） 10ml
③对苯二酚 0.85g/15ml
④乳酸银 110mg/15ml
以上①～③液用前依次混合，最后加入④液，注意避光。
上述两种显色液的25%阿拉伯胶可用双蒸水代替，但此时反应明显加快，要在镜下密切观察。
⑶ 醋酸银显色液
①硝酸银 100mg/50ml双蒸水
②10%明胶 10ml
③枸橼酸缓冲液（PH3.5） 1.7g加双蒸水至10ml
④对苯二酚 600mg
配制方法：将对苯二酚溶于③液，然后将②③液混合过滤，再加入①液。
三、酶消化液
1. 0.1%胰蛋白酶
胰蛋白酶 100mg
0.1%氯化钙（PH7.8） 100ml
配制方法：先配制0.1%氯化钙，用0.1M的NaOH将其PH值调至7.8，然后加入胰蛋白酶充分溶解。用前将胰蛋白酶消化液在水溶中预热至37oC，消化时间10~30分钟。
2. 0.4%胃蛋白酶
胃蛋白酶 400mg
0.1N HCL 100ml
配制方法：先配制0.1N HCL，然后将胃蛋白酶充分溶解，预热至37oC后使用，消化时间30分钟左右。
四、粘合剂
1. 铬矾明胶液
铬矾（或甲铬矾） 0.5g
明矾（Gelatine） 5g
蒸馏水 1000ml
配制方法：先将少许蒸馏水溶解铬矾（硫酸铬钾）后，再加入明胶及蒸馏水，于70oC水溶液中胶溶化后置电动磁力搅拌器上，持续搅拌均匀，如有沉渣可过滤后使用。

将清洁的载玻片置上述液体中浸泡数分钟后，烤干备用，可防止脱片。
2.甲醛明胶液
40%甲醛 2.5ml
明胶 0.5g
蒸馏水至100ml
配制方法：将少许蒸馏水（约80ml）将明胶加热溶解，待完全溶解后，加入甲醛，最后补充蒸馏水至100ml备用。用法同铬矾明胶液。
3. APES液
APES 1ml
丙酮 50ml
配制方法：取APES 1ml，加丙酮50ml，充分搅拌均匀备用。将清洁的载玻片放入APES液中20～30秒后，取出，用丙酮液洗去多余的APES液，注意不要留有气泡，晾干备用。经该方法处理的玻片具有良好的防脱片能力。
4.多聚赖氨酸液
多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine） 1ml
蒸馏水 10ml
配制方法：取市售Poly-L-Lysine 1ml，加入蒸馏水10ml，置塑料容器中，将清洁的玻片放入该液中5分钟，取出放置无尘干燥箱中晾干备用或60oC干燥箱烤干备用。所需容器不能用玻璃制品。经该方法处理的玻片具有很强的粘合能力。但价格较APES贵得多。
五、封固剂
1. 缓冲甘油
纯甘油（分析纯） 20ml
0.5M碳酸缓冲液（PH9.5） 20ml
配制方法：取纯甘油20ml，加入碳酸缓冲液20ml，充分混合，待气泡完全消失后，即可使用。
2. 甘油-TBS（PBS）
纯甘油 90ml
0.01MTBS 10ml
纯甘油 75ml
0.01MPBS 25ml
配制方法：按上述比例将甘油和TBS（PBS）充分混合后，置4oC静置，待气泡完全消失后，即可使用。
3. 甘油明胶
明胶 10g
甘油 10ml
蒸馏水 100ml
麝香草酚少许
配制方法：称取10g明胶于温热（40oC）的蒸馏水中，充分溶解后过滤，再加入12ml甘油混合均匀。少许麝香草酚是为了防腐。
4. 液体石蜡
液体石蜡因含杂质少，很少引起非特异性荧光，故常用于免疫荧光时标本的封固。
5.DPX
Distrene 10g
酞酸二丁酯 5ml
二甲苯 35ml
DPX为中性封固剂，用于多种染色方法均不易褪色，但使组织收缩较明显，故应尽量使其为均匀的一薄层。
六、复染剂
1. Mayer氏苏木素
配制方法详见第一篇第四章第四节。
2. 甲基绿
甲基绿 2g
蒸馏水 100ml
复染后水洗数次，常规脱水封片。
3. 核固红
核固红 0.1g
硫酸铝 15g
蒸馏水 100ml
配制方法：将核固红溶入15%硫酸铝水溶液中，加热溶解，冷却过滤后备用。复染后用流水冲洗数分钟后，常规脱水封片。

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