SPA菌协同凝集试验

基本原理

由于SPA能与IgG的Fc片段非特异性结合，同时不影响Fab片段的活性,所以当带有SPA的金黄色葡萄球菌与抗体混合，再加入适量的相应抗原，结果会使出现的凝集反应更易于观察。它对颗粒性抗原和可溶性抗原抗体反应都有协同凝集作用。此方法简便、快速、便于推广应用。

材料与试剂

1．金黄色葡萄球菌

(1) SPA阳性株：NO.1800株(国内分离株)比Cowan株(国际标准株)更为优越，在加热过程中，不易出现自家凝集，更适用于协同凝集实验。

(2) SPA阴性株：Wood 46株。

2．试用菌种 炭疽杆菌、枯草杆菌及蜡样芽胞杆菌。

3．炭疽免疫血清。

4．正常免疫血清。

5．培养基。

6．0.01Mol/L pH 7.4 PBS液，0.1%N_aN₃的0.01Mol/L pH7.4 PBS液，

0.5%福尔马林的0.01Mol/L pH 7.4 PBS液。

7．生理盐水。

8．磁力搅拌器等。

操作方法

1．将N0.1800株接种琼脂斜面培养基上，37℃培养20h~24h。

2．以少量生理盐水洗下菌体，4 000r/min离心20min。

3．将沉淀的菌体用0.01mol/L pH7.4 PBS液洗3次，然后用含0.5%福尔马林的0.01mol/L pH 7.4PBS液制成10%(V/V)悬液，置室温下3h。

4．将悬液56℃水浴30min，离心，用PBS液洗2次。最后用含0.1%NaN₃的PBS液制成10%悬液，即为SPA菌稳定液，置4℃冰箱备用。

5．将SPA悬液1ml(如从冰箱拿出，可再用PBS液洗一次)，加灭活的炭疽阳性血清0.1ml，37℃30min。

6．4 000r/min离心20min，去上清，沉淀用PBS液洗2次，最后用含0.1%N_aN₃的PBS液制成10%悬液，共10ml，此即为SPA菌的凝集用试剂。

7．取干净载玻片，用接种环取1滴已标记的SPA凝集用试剂，然后再从琼脂斜面上取少量待试细菌，充分混合，2min内纪录结果。

8．对照组的设置

(1) SPA阴性菌标记免疫血清对照。

(2) SPA阳性菌标记正常血清对照。

(3) SPA稳定液与炭疽杆菌凝集对照。

(4) 抗炭疽血清与炭疽菌凝集对照。

(5) 其它芽胞杆菌凝集试验对照。

结果判定

强度以“＋~＋＋＋＋”表示：

＋＋＋＋： 2min内，菌体凝集成大颗粒，液体透明。

＋＋＋ ： 2min内，菌体凝集成较大颗粒，液体透明。

＋＋ ： 2min内，菌体凝集成较小颗粒，液体轻度透明。

＋ ： 2min菌体部分凝集成细小颗粒,液体混浊。

－ ：2min内，无凝集现象，或2min以上才能出现细小颗粒者。