等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点
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  • 等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

  • 点击:    作者:51protocol收集   来源: 日期:2007-03-22    本站论坛

3. 装槽和电泳

用滤纸条吸去胶管上端的水封,除去下端的薄膜,水封端向上,将胶管垂直插入圆盘电泳槽内,调节好各管的高度,记下管号。每支管约1/3在上槽,2/3在下槽。上槽加入500ml 0.1M H3PO4,下槽加入500ml 0.1M NaOH,淹没各管口和电极,用注射器或滴管吸去管口的气泡。上槽接正极,下槽接负极,开启电泳仪,恒压160V,聚焦23小时,至电流近于零不再降低时,停止电泳。

4. 剥胶

取下胶管,用H2O 将胶管和两端洗2次,用注射器沿管壁轻轻插入针头,在转动胶管和内插针头的同时分别向胶管两端注入H2O少许,胶条即自行滑出,若不滑出可用洗耳球轻轻挤出。胶条置于小培养皿内,记住正极端为“头”,负极端为“尾”,若分不清时,可用pH试纸鉴定,酸性端为正,碱性端为负。

5. 固定

2支胶条置于一个小培养皿内,倒入10%三氯乙酸溶液至没过胶条,进行固定,约半小时后,即可看到胶条内蛋白质的白色沉淀带。固定完毕,倒出固定液,用直尺量出胶条长度“L2”和正极端到蛋白质白色沉淀带中心(即聚焦部位)的长度“L’

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