网站地图	本站论坛
高级搜索	收藏本站

热门关键字：　细胞培养　 pcr 　琼脂糖凝胶电泳　质粒DNA的提取　凝胶加样缓冲液　 PCR inventor

	当前位置：试验方案>蛋白试验>试验基础> 正文

IgY的应用

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-11-13 　本站论坛

IgY抗体在医学方面的应用
IgY在人类疾病诊断中的应用
　　随着实验室和临床研究对抗体需求的增加，廉价大规模抗体制备技术已成为新的研究课题。利用超免疫鸡将特异性抗体稳定持续地传至卵黄中，制备特异性多克隆抗体，成本低且产量高，有望成为规模制备特异性抗体的有效手段。由于IgY的许多优点，其在免疫学检测诊断方面正越来越被广泛应用。致病性大肠杆菌（enteropathogenic escherichia coli，EPEC）是引起婴幼儿腹泻的常见病原体，而菌毛中的结构重复蛋白A亚单位（structural repeating protein A subunit，BfpA）是EPEC发病机制中的主要致病因子，制备BfpA的IgY可以筛选人排泄物标本中EPEC的存在。2003年，De-Almeida CM等制备了抗BfpA的IgY用于免疫吸附，发现IgY可以特异性地鉴定EPEC。
　　荫俊等采用MA-104细胞转瓶培养技术，制备人型轮状病毒Wa和猴型轮状病毒SA11，以纯化病毒+佐剂对SPF纯系莱航产蛋母鸡进行强化免疫，通过盐析、柱层析和超滤方法从卵黄中制备特异性免疫球蛋白，结果表明，免疫鸡卵黄中产生高滴度特异性抗轮状病毒免疫球蛋白，其ELISA免疫效价达1.5×10 5 ，在定期加强免疫条件下，卵黄抗体效价维持在高滴度可达12个月以上。经脱脂盐析和层析纯化的IgY抗体，在4℃条件下其免疫效价可稳定保存6个月以上。体外细胞病变抑制实验结果表明，批量制备的IgY抗体具有高效价的特异性轮状病毒中和活性，可用于常规实验室和其他医学实验。
IgY对检测方法的改进
　　胶乳凝集试验是将可溶性抗原（或抗体）吸附于聚苯乙烯胶乳载体颗粒的间接凝集试验。根据此原理，将胶体金标记抗体固定于特制的载体，则为免疫金标记法。这种方法简便、快速、敏感、特异，因此广泛用于疾病的快速诊断。试验中常用的抗体是哺乳动物IgG。然而，聚苯乙烯胶乳吸附蛋白质存在结合不牢固的问题，影响了检测效果。由于IgY具有更高的特异性和敏感性，可用IgY代替哺乳动物抗体作胶乳凝集试验及制作胶体金。Davalos Pantoja L等对此做了初步研究。他们对IgY胶乳复合物进行了蛋白质吸附和解离、等电点、电场迁移率和胶体金稳定性等研究，并与IgG进行比较，发现IgY是一种疏水性更强的蛋白质，它与乳胶的结合力更强，用它包被乳胶颗粒制作的胶体金比IgG稳定性更好。
　　由于IgY本身具有良好的稳定性，用于亲和层析柱纯化制备所需蛋白，可以反复使用，提高了亲和层析法分离蛋白的效率，这使IgY用于疾病的相关性蛋白的检测更快速、价廉。Akita EM等用IgY制备的亲和层析柱分离乳清和初乳中的IgG，一年多的时间内使用了50多次，其结合力只略有下降，说明用IgY制备的亲和层析柱相当稳定。
IgY在人类疾病防治中的应用
1. 抗细菌感染
　　幽门螺旋杆菌（Helicobacter.Pylori，Hp）是引起慢性胃炎和消化性溃疡等胃肠疾病的病原菌，感染率极高。也是世界卫生组织认定的胃癌致病因子，在溃疡患者中Hp的感染率为80%，健康人群为60%，60岁以上人群为70%，胃癌、胃溃疡均属消化道疾病。Weeks等（2000）发现，位于Hp细胞膜表面存在一种专门负责调节胞质内尿酶产生的蛋白质-Urel，Urel起“质子通道”作用，可控制进入细胞的胃酸量。研究表明，含抗Hp特异性IgY的高免蛋黄可破坏Urel，使菌体失去酶保护膜，无法在胃中强酸环境下存活，从而有效消灭Hp。
　　沙门氏菌是肠道感染的常见病原菌，Lee EN等在体外实验中发现，特异性抗沙门氏菌的IgY能有效防治人类沙门氏菌性肠炎。
　　变形链球菌被公认是引起龋齿最主要的病原菌。Smith DJ等用变形链球菌葡萄糖结合蛋白B（glucan-binding protein B，GBP-B）免疫鸡获得特异性抗GBP-B的IgY，研究发现该IgY可以预防变形链球菌引起的龋齿。美国已于1999年首先生产出了抗龋病IgY产品（健齿露），目前已通过我国生物制剂的安全评价，进入我国市场。
　　阴道加特纳杆菌是引起妇科疾症的主要致病菌，林元藻等用加特纳杆菌作为抗原免疫Leghon鸡，得到高纯度特异性IgY，具有良好的生物学活性。
2. 抗病毒感染
　　轮状病毒是引起秋冬季婴幼儿腹泻的主要病原体之一，目前尚无有效的疫苗。荫俊（2000）、郭立君等（2001）分别对抗轮状病毒IgY的研制及生物学活性等方面进行了研究。目前抗轮状病毒IgY（如百贝宁）是我国已商品化的治疗和预防该病的生物制品。聂荣庆等对抗SARS-CoV鸡卵黄免疫球蛋白进行了研究。
　　乙型肝炎是一种全世界广泛流行的传染病，每年全球有约25万人死于与乙肝有关的肝病。乙肝表面抗体是预防乙肝病毒感染的保护性抗体，采用乙肝表面抗体阳性人血液制备成乙肝免疫球蛋白（注射）可中和入侵的病毒，使新生儿免受感染，机体迅速获得被动性保护免疫，但人血中提取的乙肝免疫球蛋白价格昂贵。研究表明，乙肝卵黄抗体与目前商品化的人血提取抗体有很多相同的生物活性和理化性质，如能高效研究出廉价的乙肝蛋黄抗体，则市场前景广阔。
3. 抗肿瘤治疗
　　Hensel T等制备了鸡抗金属蛋白酶的IgY。在小鼠体外试验中，这种抗体可中和金属蛋白酶的蛋白分解活性，特异地抑制C6胶质瘤细胞在视神经外植体中的扩散和浸润。这为神经系统肿瘤的治疗开辟了前景。近年来，IgY还作为药物载体用于胃肠道癌症的治疗。Yang J等从人胃癌MGC-803细胞中提取P110蛋白作抗原免疫鸡，制备了抗胃癌蛋白P110的IgY，将之作为运送抗癌药物的载体，发现该抗体能特异地识别胃肠系统的癌组织，这为胃肠系统癌症的治疗开辟了一条新的途径，也为其他肿瘤的治疗提供了新思路。
4. 功能性食品
　　IgY可作为婴幼儿食品或中、老年人的保健食品添加剂，提高人体对各种疾病的抵抗力。美国食品和药品管理局（FDA）认为，卵黄免疫球蛋白作为食品比作为药物更有利，并将其列入“一般公认安全物质（Gen-erally Accepted as Safe，GRAS）”范畴，因此，如同每日饮用牛奶一样，消费者可放心食用卵黄抗体。
　　Chae等（2000）研究了利用产蛋母鸡生产抗大肠杆菌O157:H7对抗体的方法，并已取得专利。分离大肠杆菌O157:H7，于90℃灭活5～10min，制成抗原免疫母鸡，获得抗大肠杆菌O157:H7的IgY。含抗大肠杆菌O157:H7的全蛋可直接应用于食品，亦可从鸡蛋中分离卵黄，冻干制成粉末，添加到待加工的粮食中。王忠泽等（2002）采用大肠杆菌O157:H7933菌株免疫SPF莱杭鸡，制备抗O157:H7特异性IgY，动物被动保护实验结果表明，口服IgY对乳鼠肠道感染模型具有明显的保护作用;动物毒性实验表明，口服抗体安全可靠，无毒性作用。