包涵体复性注意事项
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包涵体复性注意事项

点击:   作者:   来源:  时间: 2007-11-09  本站论坛
1. 最适pH值范围为8.0-9.0之间;
2. 温度适宜选择4℃;
3. 复性过程蛋白浓度不宜过大,一般为0.1-0.2mg/mL;
4. 复性时间一般为24-36小时;
5. 低分子化合物 如L-Arg有助于增加复性中间产物的溶解度;脲、盐酸胍、烷基脲、以及碳酸酰胺类等,在非变性浓度下是很有效的促进剂,都可阻止蛋白聚集;Tris对蛋白质复性有促进作用;EDTA可以防止蛋白降解;
6. 氧化还原体系,如GSH/GSSG、DTT/GSSG、DTE/GSSG等.;
7. 首先要获得较高纯度的包涵体;
8. 包涵体溶解要彻底,一般应使溶解液体量较大,不要怕蛋白被稀释,要有助溶措施;
9. 透析前后均要离心;
10. 透析不能太快;
11. 纯化的最佳条件要摸索;
12. 包含体要彻底洗涤干净,洗涤液中加入适量Triton-X100;
13. 包含体溶解后装入透析袋在复性液中复性;
14. 复性完毕在低浓度的缓冲液中连续缓慢透析12-24h ;
15. 复性率的测定时要据变性蛋白和非变性蛋白的光学性质不同测定
16. TritionX100、SDS这一类去垢剂最后不易去除,在制药行业中一般不允许采用。用Triton洗涤有些包涵体效果不是很好。包涵体洗涤是纯化极为重要的一步,改变培养条件,再洗涤包涵体,有时可以在上柱前已经只剩下3-4条杂带,这样后续的纯化就很方便了。

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