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包涵体复性注意事项

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-11-09 　本站论坛

1. 最适pH值范围为8.0-9.0之间；
2. 温度适宜选择4℃；
3. 复性过程蛋白浓度不宜过大，一般为0.1-0.2mg/mL；
4. 复性时间一般为24-36小时；
5. 低分子化合物如L-Arg有助于增加复性中间产物的溶解度；脲、盐酸胍、烷基脲、以及碳酸酰胺类等，在非变性浓度下是很有效的促进剂，都可阻止蛋白聚集；Tris对蛋白质复性有促进作用；EDTA可以防止蛋白降解；
6. 氧化还原体系，如GSH/GSSG、DTT/GSSG、DTE/GSSG等.；
7. 首先要获得较高纯度的包涵体；
8. 包涵体溶解要彻底，一般应使溶解液体量较大，不要怕蛋白被稀释，要有助溶措施；
9. 透析前后均要离心；
10. 透析不能太快；
11. 纯化的最佳条件要摸索；
12. 包含体要彻底洗涤干净，洗涤液中加入适量Triton-X100；
13. 包含体溶解后装入透析袋在复性液中复性；
14. 复性完毕在低浓度的缓冲液中连续缓慢透析12-24h ；
15. 复性率的测定时要据变性蛋白和非变性蛋白的光学性质不同测定
16. TritionX100、SDS这一类去垢剂最后不易去除，在制药行业中一般不允许采用。用Triton洗涤有些包涵体效果不是很好。包涵体洗涤是纯化极为重要的一步，改变培养条件，再洗涤包涵体，有时可以在上柱前已经只剩下3-4条杂带，这样后续的纯化就很方便了。

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