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凝胶过滤原理

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-11-08 　本站论坛

　凝胶是一种多孔性的不带表面电荷的物质，当带有多种成分的样品溶液在凝胶内运动时，由于它们的分子量不同而表现出速度的快慢，在缓冲液洗脱时，分子量大的物质不能进入凝胶孔内，而在凝胶间几乎是垂直的向下运动，而分子量小的物质则进入凝胶孔内进行“绕道”运行，这样就可以按分子量的大小，先后流出凝胶柱，达到分离的目的。
具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用最广，商品名是sephadex型号很多，从G10到G200，它的主要应用范围是：①分级分离各种抗原与抗体；②去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射性同位素以及水解的蛋白质碎片；③分析血清中的免疫复合物；④分子量的测定。
葡聚糖凝胶的种类与性能
葡聚糖又名右旋糖酐，在它们的长链间以三氯环氧丙烷交联剂交联而成。葡聚糖凝胶具有很强的吸水性，交联度大，吸水性小，相反交联度小，吸水性大。商品名以SephadexG表示，G值越小，交联度越大，吸水性越小，G值越大，交联度越小，吸水性就越大，二者呈反比关系，G值大约为吸水量的10倍。由此可以根据床体积而估算出葡聚糖凝胶干粉的用量。
表Sephadex1的种类与特性：

型号

分离范围（分子量）

吸水量（ml/g）

最小溶胀时（h） 20℃～25℃ 100℃

床体积（ml）/干凝胶（mg）

G10

＜700

1.0±0.1

2~3

G15

＜1 500

1.5±0.2

2.5~3.5

G25

＜5 000

2.5±0.2

4~6

G50

1500～20 000

8.0±0.3

9~11

G75

3 000～70 000

7.5±0.5

241

12~15

G100

4 000～15 000

10.0±1.0

721

15~20

G150

5 000～800 000

15.0±1.5

721

20~30

G200

5 000～300 000

20.0±2.0

721

30~40

G25、G50有四种颗粒型号：粗（100µ~300µ）、中（50µ~150µ）、细（20µ~80µ）和超细（10µ~40µ）。G75～G200又有两种颗粒型号：中（40µ～120µ），超细（10µ～40µ）。颗粒越细，流速越慢，分离效果越好。
DEAE－纤维素与Sephadex1比较：

项目	DEAE	Sephadex
交换量	小	较大
非特异性吸附	较大	小
分离纯度	较好	好
分离时间	较粗	较长
应用范围	较窄	较宽
预处理	繁琐	方便

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