微生物糖发酵（生化）试验
- 点击： 作者： 来源： 日期：2007-12-27 本站论坛
2. 培养基：蛋白胨水培养基。
3. 试剂，欧立希（Ehrlich）试剂（对二甲基氨基苯甲醛）
(三)实验方法
1. 分别将大肠杆菌，伤寒杆菌接种于两支蛋白胨水培养基中。
2. 置37℃培养2~3天后，每管沿管壁各加欧立希试剂0.5~1ml于培养液面上，待1-2分钟后观察结果：在交界面出现玫瑰红色环即为吲哚试验阳性，无红色环即为阴性。
(四)、实验结果
大肠杆菌：+ ；伤寒杆菌：- 。
六、硫化氢（H2S）产生试验
（一）、实验原理
某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸），生成硫化氢。硫化氢遇到培养基中的铅盐（醋酸铅）或铁盐（硫酸亚铁），则形成黑褐色硫化铅或硫化亚铁沉淀物。培养基内含有还原剂硫代硫酸钠，使形成的硫化氢不再氧化。
(二)、实验材料
1. 菌种：大肠杆菌，伤塞杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。
2. 培养基：醋酸铅培养基。
(三)实验方法
1. 分别以半固体穿刺接种法将大肠杆菌，伤寒杆菌穿刺接种地两支醋酸铅培养基内。
2. 置37℃培养48-72小时（2-3天）。
3. 观察结果：取出后对光观察，若沿穿刺线有黑褐色沉淀物，即表示该菌能产生硫化氢（H2S），否则反之。
(四)、实验结果
大肠杆菌：-（无黑色沉淀线生成）
伤寒杆菌：+（有黑色沉淀线生成）
七、尿素分解试验
（一）、实验原理
某些细菌如变形杆菌，具有尿素分解酶，能分解尿素而产生氨，氨溶于水变成氢氧化铵，使培养基变碱而呈红色即为阳性。
(二)、实验材料
1. 菌种：变形杆菌，伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物。
2. 培养基：尿素培养基。
(三)实验方法
1. 分别以斜面接种法将变形杆菌，伤寒杆菌接种于两支尿素斜面培养基上。
2. 置37℃培养18-24小时。
3. 取出观察结果，培养基变为红色，即尿素分解试验阳性，若不变色，即为尿素分解试验阴性。
(四)、实验结果
变形杆菌：+ ；伤寒杆菌：- 。
八、氧化酶试验
（一）、实验原理
某些细菌如奈瑟菌和绿脓杆菌，具有氧化酶（靛基酚氧化酶），能将氧化酶试剂（盐酸二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺）氧化成红色的醌类化合物，即为氧化酶试验阳性。
(二)、实验材料
1. 菌种：淋球菌或脑膜炎球菌，白色葡萄球菌18-24小时巧克力斜面培养物。
2. 培养基：巧克力平板。
3. 试剂：0.5-1%盐酸对二甲基苯胺（或盐酸二甲基对苯二胺或盐酸对氨基二甲苯胺）水溶液。
(三)实验方法
1. 将脑膜炎球菌或淋球菌，白色葡萄球菌分别接种于巧克力平板；
2. 置37℃培养24小时后取出；
3. 滴加新鲜配制的0.5-1%盐酸对二甲基苯胺水溶液于固体培养基上；
4. 观察结果：加试剂后，若菌落出现红色→深红色→紫黑色变化均为阳性；反之阴性。
(四)、实验结果
脑膜炎球菌和淋球菌：+ ；白色葡萄球菌：- 。
【注意事项】
1. 此项试验应避免含铁物质，因遇铁会出现假阳性。
2. 试剂在空气中易氧化，故应新鲜配制。冰箱保存使用不超过两周。
3. 若要分离培养脑膜炎球菌，应在菌落变成紫黑色之前立即转种。否则细菌容易死亡。
《附录》
1．V-P试验剂的配制
甲液：α-萘酚 6g 95%洒精 100ml
乙液：KOH 40g 肌酸0.3g 蒸馏水 100ml
2．甲基红试剂的配制
甲基红 0.04g 95%酒精 60ml 蒸馏水 40ml
先使甲基红溶解于酒精中，再加入蒸馏水，混合，摇匀即成。
3．欧立希（Ehrlich）试剂的配制
对位二甲基氨基苯甲醛 4g
95%酒精 380ml
浓硫酸或浓盐酸80ml
三种成分混合即成，瓶口要严密，以免挥发。
4．蛋白胨水培养基的制备
成分：蛋白胨10g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml
制法：
（1）先用少量蒸馏水将蛋白胨和氯化钠相混合溶解,再加足蒸馏水量。
（2）调节pH至7.6、用滤纸过滤。
（3）分装中试管，每管约3-4ml，加塞灭菌后备用。
用途：供吲哚试验用
5．单糖发酵管的制备
成分：蛋白胨水培养基 100ml
0.2%酚红 1ml
所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g
制法：
（1）将上述成分溶化，混匀分装于内含有倒置小玻璃管的小试管中，每管约2ml，加塞。
（2）小倒管排气，灭菌（8-10磅，20-30分钟），贮存备用。
用途：供单糖发酵试验用。
附注：0.2%酚红配制法
