分离病毒一般用超离心,密度梯度离心,聚已二醇沉淀等方法,我是做SV40病毒方面的,我介绍一个简易方法: 小规模分离SV40病毒颗粒和病毒DNA: 1)培养Vero细胞形成单层,将SV40-776标准株种毒于小方瓶中,直到细胞达到完全病变。 2)将病变的细胞刮下来,溶于500 ul的PBS
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  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-10-29    本站论坛
分离病毒一般用超离心,密度梯度离心,聚已二醇沉淀等方法,我是做SV40病毒方面的,我介绍一个简易方法:
小规模分离SV40病毒颗粒和病毒DNA:
1)培养Vero细胞形成单层,将SV40-776标准株种毒于小方瓶中,直到细胞达到完全病变。
2)将病变的细胞刮下来,溶于500 ul的PBS中,并将其反复冻溶4次,11000rpm离心10分钟,收集上清。
3)向上清中加入0.4ug/ul的RNase 37℃孵育45分钟,加NaCI使其终浓度为1M,0℃孵育1小时,7500rpm离心10分钟,收集上清。
4)缓慢加入PEG终浓度10%(w/v)并混匀,冰孵1小时,随后7500rpm离心10分钟。去上清,将沉淀溶于50ul 10mM Tris-HCI pH8.0的溶液中。可将其在4℃储存,或被用于分离SV40的DNA。
5)加入蛋白酶K终浓度为50ug/ml,56℃孵育1小时。然后加入1,4二硫代-苏糖醇终浓度为25Mm,56℃孵育半小时。
6)用酚/氯仿进行抽提病毒DNA,随后乙醇沉淀。加入病毒储存液,-20℃保存待用。长期保存要-80℃.
结果表明此方法的全部操作可在1.5ml的小管中进行,大约需要6小时即可完成,粗略估计从一个小方瓶中能够收获大约为500ng的DNA,基本满足了一般检测的需要。

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