2000 r/min 低温离心10分钟
收集上清,即为VSV增殖的病毒液,分装冻存,待测效价
结果,在微载体悬浮培养的三株细胞所繁殖VSV病毒不仅产量大,而且病毒效价平均高1LogTCID50,尤以CHO-K1效价最高,平均可达7.75logTCID50比原先的毒种效价还要高1.75LogTCID50,又起到了提高病毒效价的作用。
此方法也可应用于生产病毒疫苗,只要疫苗株病毒的敏感细胞能在微载体上大量生产。若疫苗株是减毒活疫苗株,此法生产的病毒可直接制备活疫苗。若疫苗株为非减毒活疫苗株,此法生产的病毒可用甲醛灭活法制备死疫苗。
2、转瓶培养法
此法是目前各大生物制品研究所常用于生产疫毒疫苗的方法,如生产脊髓灰质炎病毒疫苗,麻疹疫苗等。
将细胞制备成悬液后,在温室内(37℃)使支架以8~12转/小时缓慢转动,以使细胞贴壁,当加入病毒后,待细胞出现 以上细胞病理性改变(CPE)时,标志病毒已大量繁殖,此时收获病毒,按生物制品程序加工成疫苗。
3、罗式瓶培养
将许多大罗氏瓶,在净化室内,把制备好的细胞悬液人工加入瓶内,100mL/瓶,在温室内的货架上一排排放置,进行静置贴壁培养,待细胞呈单层后,倒去旧液,加含病毒疫苗株和维持液,继续静置培养,每天观察细胞和记录温室的温度,待细胞有明显的CPE产生时,收获病毒液,然后按疫苗生产加工工艺制成疫苗。
以上2、3两种方法是我国各大生物制品所常规方法,由于制品工艺的要求,目前仍然采用,但正在不断改进和采用新工艺、新方法和高技术来生产疫苗。
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