【材料】
1. 菌种：大肠杆菌，伤塞杆菌18~24小时琼脂斜面培养物。
2. 培养基：醋酸铅培养基。
【方法】
1. 分别以半固体穿刺接种法将大肠杆菌，伤寒杆菌穿刺接种地两支醋酸铅培养基内。
2. 置37℃培养48-72小时（2-3天）。
3. 观察结果：取出后对光观察，若沿穿刺线有黑褐色沉淀物，即表示该菌能产生硫化氢（H
2S），否则反之。
【结果】
大肠杆菌：-（无黑色沉淀线生成）
伤寒杆菌： （有黑色沉淀线生成）
七、尿素分解试验
【原理】
某些细菌如变形杆菌，具有尿素分解酶，能分解尿素而产生氨，氨溶于水变成氢氧化铵，使培养基变碱而呈红色即为阳性。
【材料】
1. 菌种：变形杆菌，伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物。
2. 培养基：尿素培养基。
【方法】
1. 分别以斜面接种法将变形杆菌，伤寒杆菌接种于两支尿素斜面培养基上。
2. 置37℃培养18-24小时。
3. 取出观察结果，培养基变为红色，即尿素分解试验阳性，若不变色，即为尿素分解试验阴性。
【结果】
变形杆菌： ；伤寒杆菌：- 。
八、氧化酶试验
【原理】
某些细菌如奈瑟菌和绿脓杆菌，具有氧化酶（靛基酚氧化酶），能将氧化酶试剂（盐酸二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺）氧化成红色的醌类化合物，即为氧化酶试验阳性。
【材料】
1. 菌种：淋球菌或脑膜炎球菌，白色葡萄球菌18-24小时巧克力斜面培养物。
2. 培养基：巧克力平板。
3. 试剂：0.5-1%盐酸对二甲基苯胺（或盐酸二甲基对苯二胺或盐酸对氨基二甲苯胺）水溶液。
【方法】
1. 将脑膜炎球菌或淋球菌，白色葡萄球菌分别接种于巧克力平板；
2. 置37℃培养24小时后取出；
3. 滴加新鲜配制的0.5-1%盐酸对二甲基苯胺水溶液于固体培养基上；
4. 观察结果：加试剂后，若菌落出现红色→深红色→紫黑色变化均为阳性；反之阴性。
【结果】
脑膜炎球菌和淋球菌： ；白色葡萄球菌：- 。
【注意事项】
1. 此项试验应避免含铁物质，因遇铁会出现假阳性。
2. 试剂在空气中易氧化，故应新鲜配制。冰箱保存使用不超过两周。
3. 若要分离培养脑膜炎球菌，应在菌落变成紫黑色之前立即转种。否则细菌容易死亡。
《附录》
1．V-P试验剂的配制
甲液：α-萘酚 6g 95%洒精 100ml
乙液：KOH 40g 肌酸0.3g 蒸馏水 100ml
2．甲基红试剂的配制
甲基红 0.04g 95%酒精 60ml 蒸馏水 40ml
先使甲基红溶解于酒精中，再加入蒸馏水，混合，摇匀即成。
3．欧立希（Ehrlich）试剂的配制
对位二甲基氨基苯甲醛 4g
95%酒精 380ml
浓硫酸或浓盐酸80ml
三种成分混合即成，瓶口要严密，以免挥发。
4．蛋白胨水培养基的制备
成分：蛋白胨10g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml
制法：
（1）先用少量蒸馏水将蛋白胨和氯化钠相混合溶解,再加足蒸馏水量。
（2）调节pH至7.6、用滤纸过滤。
（3）分装中试管，每管约3-4ml，加塞灭菌后备用。
用途：供吲哚试验用
5．单糖发酵管的制备
成分：蛋白胨水培养基 100ml
0.2%酚红 1ml
所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g
制法：
（1）将上述成分溶化，混匀分装于内含有倒置小玻璃管的小试管中，每管约2ml，加塞。
（2）小倒管排气，灭菌（8-10磅，20-30分钟），贮存备用。
用途：供单糖发酵试验用。
附注：0.2%酚红配制法
酚红（phenol red）0.2g
1/10N苛性钠（NaOH） 8ml
蒸馏水 92ml
将酚红入研钵徐徐加入苛性钠研磨，再补足蒸馏水即成。若需长时间保存，可高压灭菌后贮存备用。
6．葡萄糖蛋白胨水培养物
成分：蛋白胨5g 葡萄糖5g
制法：
（1）将上述成分溶解于蒸馏水中。
（2）调节pH至7.6，用滤纸过滤除渣。
（3）分装中试管，每管约3-4ml，灭菌后备用。
用途：供甲基红及V-P试验用。
7．枸橼酸盐斜面培养基的制备
成分：磷酸二氢铵0.1g 磷酸氢二钾0.1g
硫酸镁0.02g 枸橼酸钠0.23g
氯化钠0.5g 琼脂2g
蒸馏水100ml 0.5%溴麝香草酚蓝酒精溶液2ml
制法：
（1）先将上述各种盐类溶解于蒸馏水中，使其完全溶解。
（2）矫正pH至6.8，然后加入琼脂和指标剂。
（3）摇匀，脱脂棉过滤，分装中试管，每管约3-5ml。
（4）灭菌后置成斜面备用（冷后为绿色）
用途：供枸橼酸盐利用试验用。
8．醋酸铅培养基的制备
成分：2%肉汤琼脂200ml 硫代硫酸钠0.05g
醋酸铅10g 蒸馏水100ml
制法：
（1）先将10g醋酸铅加入100ml蒸馏水中融化，间歇灭菌或低压菌后备用（10%醋酸铅溶液）。
（2）加热溶化2%肉汤琼脂200ml，加入硫代硫酸钠0.05g，混合后高压灭菌。
（3）从高压灭菌锅取出，待冷却至45℃左右时。无菌操作加入无菌的10%醋酸铅溶液1毫升，摇匀。
（4）分装小试管，每管约2ml，直立待冷凝后备用。
用途：供硫代氢生成试验用。
说明：醋酸铅与硫代硫酸钠不宜久然。
9．尿素培养基的制备
成分： 蛋白胨1g 氯化钠5g
葡萄糖1g 蒸馏水900ml
琼脂15~20g 0.1%酚红 12ml
20%尿素水溶液（无菌）100ml
制法：（1）除尿素、琼脂和酚红外，其余成分溶于水中，加热溶化，矫正pH至6.8~6.9。
（2）加入琼脂和酚红，8~10磅10分钟灭菌。
（3）冷却至60℃后加入无菌尿素溶液，摇匀。
（4）分装中试管（无菌），每管3~4ml，置成斜面备用。
用途：供尿素分解试验用。
说明：（1）尿素不耐热，也不能久存，只能用滤器除菌。
（2）无菌尿素溶液制备：称取尿素20g，混合于100ml蒸馏水中，充分摇匀，用G6滤菌器过滤除菌，以达到无菌的目的。
10．巧克力色琼脂平板的制备
成分：肉汤琼脂100ml 无菌脱纤维羊或兔血10ml。
制法：
（1）将肉汤琼脂加热溶化，趁热加入脱纤维血，摇匀。
（2）倾注平板，待冷却成巧克力色，备用。
用途：用于培养脑膜炎双球菌或淋球菌。
说明：加血一定要趁热加。
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