病原性球菌的检测

一、主要病原性球菌的形态、培养特征
【形态示数】
1. 葡萄球菌（革兰染标本）：革兰染色阳性，为正圆形，呈葡萄串状排列，亦有单个散在分布。
2. 链球菌（革兰染色标本）：革兰染色阳性，圆形或卵圆形，呈链状排列。
3. 肺炎双球菌（小鼠腹腔液涂片，HiSS染色）：革兰阳性球菌，矛头状成双排列，平端相对，尖端相背。荚膜染色片中，菌体呈红色，菌体周围的荚膜呈淡红色或无色。
4. 脑膜炎双球菌（脑脊液涂片，美兰染色）：革兰阴性球菌，肾形成双排列，凹面相对，菌体呈浅兰色，多位于中性粒细胞浆内，胞浆外也有少数散在分布。
【培养特征】
1. 葡萄球菌在血液琼脂平板上的生长表现：菌落为圆形，中等大小，表面光滑，边缘整齐，不透明；金黄色葡萄球菌菌落呈现金黄色，而白色葡萄球菌，柠檬色葡萄球菌菌落呈白色或柠檬色（如菌落色素不易区别时，用白纸片沾菌落少许有助观察）；金黄色葡萄球菌的菌落周围多有透明溶血环，而其他葡萄球菌一般无溶血环（仅少数新分离白色葡萄球菌可呈现微溶血现象）。
2. 链球菌在血液琼脂平板上的生长表现：除丙型链球菌外，菌落均较微小，如针尖大，圆形，灰色，半透明。根据溶血性将链球菌分为三类。甲型链球菌的菌落周围有小的草绿色溶血环，乙型链球菌有较大的透明溶血环，丙型链球菌不溶血。
二、葡萄球菌血浆凝固酶试验（操作）
【原理】
血浆凝固酶试验是区别致病性葡萄球菌与非致病葡萄球菌的最重要指标。致病性葡萄球能产生血浆凝固酶，此酶的作用类似凝血酶原，在血浆中激活剂的作用下，可使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白，从而导致血浆凝固（呈现块状或颗粒状）。非致病性葡萄球菌不产生此酶，因而不能凝固血浆。此酶有两种存在形式：结合于细胞壁上血浆凝固酶，采用玻片法测；游离形式的血浆凝固酶，采用试管法检测。
【材料】
1. 金黄色、白色葡萄球菌琼脂斜面18~24小时培养物。
2. 1:2人或兔血浆。
3. 生理盐水、玻片、接种环等。
【方法】
1. 取载玻片一张，用蜡笔分成三等份。
2. 于第一、二格内滴加入血浆各1滴，于第三格内滴加生理盐水1滴。
3. 取金黄色葡萄球菌斜面培养物少许，分别混悬于第三格及第一格内，取白色葡萄菌混悬于第二格内，分别研磨混匀。静置2~3分钟。
【结果】
第三格和第二格中细菌呈出均匀混浊，而第一格中细菌呈现块装或颗粒状凝固现象，即判定为血浆凝固酶阳性。
三、抗链球菌溶血素“O”试验
【原理】
链球菌“O”溶血素是A族溶血性链球菌的代谢产物之一，能溶解人或兔的红细胞，对氧敏感，如与空气中的氧接触；能使蛋白质上的-SH基氧化成-S-S基，失去溶血活性。在实验中可借还原剂的作用，使它重新恢复溶血活力。
溶血素“O”具有很强的抗原性，人感染该菌后，2~3周产生相应的抗体，此种抗体能中和溶血素“O”的溶血活力。因此，测定患者血清中抗链球菌溶血素“O”抗体的效价，可作为风湿热等疾病的辅助诊断。抗“O”试验的效价是指完全不溶血之血清最高稀释度。
【材料】
1. 患者血清：1：50稀释
2. 溶血素“O”及还原剂片剂（按说明配制）
3. 1%兔红细胞
4. 生理盐水，试管、吸管，37℃水浴箱等。