(2)靛基质(吲哚)试验:
①原理:各种细菌分解氨基酸的能力不同,借此可鉴别菌种。有些细菌如大肠杆菌、变形杆菌等具有色氨酸分解酶,可分解蛋白胨中的色氨酸生成无色的吲哚——即靛基质,当加入靛基质试剂(对二甲基氨基苯甲醛),形成玫瑰色吲哚,可用肉眼观察。
②蛋白胨水培养基的制备:将蛋白胨1g、NaCl0.5g加入蒸馏水100ml,调pH值为7.6,分装试管,每管约3~4ml。经68.95kPa高压灭菌15分钟后备用。
③方法与结果:用灭菌接种环分别取大肠杆菌、伤寒杆菌少许接种于蛋白胨水培养基中,经37℃培养24~48小时。取出培养物后,加入2~3滴乙醚,混匀静置(使无色吲哚和乙醚一并上升至液体表面),再沿管壁加入2~3滴靛基质试剂于培养物表面,在两者接触面上呈玫瑰红色为阳性,黄色为阴性。
(3)硫化氢试验:
①原理:有些细菌如变形杆菌、副乙型伤寒杆菌等能分解含硫氨基酸(胱氨酸等)生成硫化氢,如培养基中含有铅盐(如醋酸铅)或者铁盐(如硫酸亚铁),硫化氢可与之结合生成黑褐色的沉淀物。
②醋酸铅培养基的制备:将醋酸铅0.5g、硫代硫酸钠0.25g等加入到500ml2%的肉汤琼脂中,调PH值为7.4~7.6, 分装试管,每管约3~4ml。经68.95kPa高压灭菌15分钟后备用。
③方法与结果:用灭菌接种针分别取大肠杆菌、变形杆菌少许穿刺接种于醋酸铅培养基中, 经37℃培养24小时。沿穿刺线部位呈现黑色为阳性,无黑色出现为阴性。
(4)色素的产生:
原理:有些细菌在代谢过程中,可合成不同颜色的色素,有利于细菌的鉴定。
色素分为两类:脂溶性色素:仅菌落本身着色,培养基不染上颜色。
水溶性色素:色素本身可溶解,渗透到周围的的培养基中。
细菌的色素,在室温、有氧、含血清、牛乳等培养基中产生丰富。
方法:观察两种细菌的色素,其颜色、特性等。
实验报告:
1.记录上次双糖铁培养基、半固体培养基接种的结果(绘图并分析);
2.记录玻片凝集试验的结果(绘图并分析);
3.结合肠道致病菌的系列检查结果作出最后鉴定。
4. 记录细菌代谢产物的观察结果(绘图并简要分析):
单糖发酵试验、硫化氢试验、吲哚试验。
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