细胞内细胞因子的流式细胞仪检测

D.PMA终浓度25ng/mL细胞悬液

② Ionomycin （Alexis,目录号ALX-450-006-M001）

A. 于乙醇中配制成浓度0.5mg/mL

B. －20℃储存

C. 每次实验用无菌无叠氮钠PBS 1：10稀释储存液

D. Ionomycin终浓度1g/mL细胞悬液

③ Staphylococcal enterotoxin B(SEB) (Sigma,Catalog No.S-4881)

A. 无菌无叠氮钠PBS调节浓度0.5mg/mL

B. 4℃储存

C. SEB终浓度10g/mL细胞悬液

④ CD3：包被在培养板中，在蛋白转运抑制剂存在下活化未稀释的血液细胞

⑤ CD28：加速不同刺激剂（包括SEB、CD3等）的活化效应，浓度一般为10ug/ml

5、阻断剂

阻断高尔基体介导的转运作用，使得刺激细胞表达的细胞因子聚集在胞浆内

① Brefeldin-A(BFA) （eBioscience，目录号00-4506）

A. 于DMSO中调节浓度5mg/mL
B. 分装(20L)，-20℃储存。勿反复冻融。
C. 每次实验用无菌无叠氮钠PBS 1：10稀释储存液
D. 激活最后4－5小时BFA终浓度10g/mL细胞悬液。

注意：BFA过度孵育会导致细胞活力下降

② Monensin （eBioscience，目录号00-4505）